人脐血间充质干细胞移植对大鼠中枢神经系统损伤的影响研究.pdf

中文摘要 人脐血间充质干细胞移植对大鼠中枢神经系统损伤的影响研究 摘 要 长期以来，研究者普遍认为成年哺乳动物的中枢神经系统的自我修复 能力是十分有限的，成熟神经元缺少分裂增殖的能力，一旦损伤则不能再 生，损伤后只能由增生的胶质细胞来代替。因此，对于中枢神经系统损伤 的治疗一直缺乏有效的手段，导致中枢神经系统损伤的患者常常遗留严重 的神经功能缺失，给社会和个人带来沉重的经济和心理负担。 干细胞是一类具有自我更新能力、高度未分化性和多向分化潜能的细 胞。近年来，干细胞的研究获得了突飞猛进的进展，被《science》杂志评 为20世纪世界十大科学突破之一，干细胞研究以及利用干细胞治疗疾病 的细胞组织工程已经成为继人类基因大规模测序完成后生命科学中最活 跃的研究领域之一。近年来研究表明成年哺乳动物的大脑皮层、室管膜下 stem 区、海马和纹状体等处都存在神经干细胞(Neuralcell，Nsc)，具有 自我复制更新、持续分化为神经元和神经胶质细胞的能力，系列动物实验 表明NsC移植可与宿主神经纤维建立突触联系，并减少神经功能的缺失， 但由于其不易从自身获得及存在伦理学等问题，其实用性受到很大限制， 因此寻找一种合适的干细胞来源进行移植以代替受损的神经元、星形胶质 细胞和少突胶质细胞来修复神经系统损伤成为人们的研究热点。 人脐血作为一种干细胞来源，具有来源丰富、采集方便、抗原性弱、 可自体储存且无伦理学问题等优点。早在20年以前，Ogawa等人就发现 在人脐血中存在原始的造血干细胞，并成功应用于白血病患儿的骨髓移 植，取得良好的效果；随着近年来研究的深入，发现脐带血中不但含有造 stemcells， 血干细胞，而且还含有丰富的间充质干细胞(Mesenchvmal MSCs)，其形态学表现、生长曲线和免疫表型与骨髓及胎肝来源MSCs 相似，并可以向脂肪、骨和软骨组织等分化。我们在前期研究发现，人脐 血来源的MSCs可在适当条件下可诱导分化为神经样细胞，但分化比率较 低。因此，如何提高其向神经细胞定向分化比率，并观察移植细胞体内移 植对中枢神经系统损伤后神经功能恢复的影响，成为人脐血Mscs早日应 用于临床需要迫切解决的一个问题；核转录因子xB配体受体激动因子 中文摘要 activator B (ReceptorofNF．Kappa1igand，RANKL)是近年来发现的1个 新的细胞因子，可诱导神经元的两种单胺类神经递质的组胺受休 l心for (Receptorhistamine，H2R)和肾上腺素能儿儿茶酚胺受体(“ catecholamine 1．adrenergic receptor’ADRAIA)表达}二调，并通过激活核转 录凶子KB(Nuclearfactor B)在细胞的生长训控中发挥晕 KappaB，NF—K 要作用，但其在脐血Mscs向神经细胞分化中的作用以及对脐血MSCs 体内移植的影响尚未明|r。因此，我们进行了人脐血来源的MsCs向神经 细胞定向诱导分化的体外以及体内研究，观察RANKL对MSCs分化的影 响，探讨人脐血MSCs移植在中枢神经系统损伤后的作用，为人脐血MSCs 和RANKL在神经科1学领域的应J1j提供理论依据。 l体外诱导人脐血间充质干细胞向神经细胞定向分化的研究 本研究目的在于从人脐血中分离、培养、扩增MScs，进行细胞表犁 鉴定，体外诱导其向神经元和神经胶质细胞分化，探讨RANKL和BDNF 对人脐血MScs向神经细胞分化的影响。 无菌条件F，采集正常分娩胎儿脐带血，加抗凝剂混匀，4～8h内进 行分离。1-’％羟乙基淀粉离心去除红细胞，细胞悬液按1：2体积比加至 FicoIl淋巴细胞分离液上，离心吸取中间白膜层及白膜L层细胞，拨 l×106／ml密度接种于75cm培养瓶中，培养液为含10％胎牛血清的DMEM， 放入37℃饱和湿度的c02细胞孵箱内进行培养。48h后全量更换培养液，