RNA干扰沉默NF-κB+p65基因表达抑制胰腺癌PANC1细胞增殖与侵袭的研究.docVIP

生生堕堕痘盘圭垫！生！旦筮！鲞筮！翅ｇ！ｉ！』￡塑！望！趔：垒Ｐ曼！！鲤！：！塑：！：型！：２  ＮＦ．ＫＢ在细胞的增殖、分化、凋亡中起到重要的 调控作用，与多种疾病的发生，有着密切的联系¨。。 人胰腺癌中ＮＦ．ＫＢ以ｐ６５组成性活化为主，它与胰 腺癌的转化、侵袭、转移、凋亡抵抗等行为密切相 关【２４１。ＲＮＡ干扰（ＲＮＡ ｉｎｔｅ如ｒｅｎｃｅ，ＲＮＡｉ）是目前 最有效的基因沉默技术。本实验设计针对人ＮＦ—ＫＢ  ３．ｓｉＲＮＡ转染：转染前１ ｄ，在标准６孔板中按 （３～８）×１０５个／孔的数量接种ＰＡＮＣｌ细胞，加入 不含抗生素的含ｌｏ％胎牛血清的高糖型ＤＭＥＭ培 养液，培养到细胞融合度达６０％一７０％。实验分３ 组：空白对照组、阴性对照组（ｓｔｅａｌｔｈｌ’Ｍ ｓｉＲＮＡ感 染）、ｓｉＲＮＡ组（ｓｉＲＮＡ感染）。每组实验重复６次。 ｐ６５的小干扰ＲＮＡ（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅ如ｒｅｎｃｅ ＲＮＡ，ｓｉＲＮＡ）， ４．ＮＦ－ＫＢ ｐ６５ ｍＲＮＡ与ＩＣＡＭ－ｌ ｍＲＮＡ检狈０：转 观察其导入对人胰腺癌ＰＡＮＣｌ细胞株ＮＦ．ＫＢ ｐ６５ 表达的抑制作用及对肿瘤细胞增殖和体外侵袭潜能 染后２４ ｈ，用Ｔｒｉｚ０１试剂提取各组细胞总ＲＮＡ，分光 光度计检测ＲＮＡ浓度及纯度。应用ＲＴ－ＰＣＲ检测 的影响。 ＮＦ—ＫＢ ｐ６５ ｍＲＮＡ与ＩＣＡＭ一１ ｍＲＮＡ表达。ＮＦ