β3-AR基因稳定表达细胞株构建及PPAR-γ2受体对其表达调节.pdf

摘要 目的：首先构建人过氧化物酶体增殖体激活受体72(hPPARl2) 和人13 3肾上腺素受体基因(野生型、突变型)全长eDNA克隆及真核 人13 B3-AR稳定转染到人神经 3-AR重组表达载体pcDNA3．1(+)／h 母细胞瘤细胞(SH．SY5Ⅵ中进行表达；其次在建立的人稳定表达细 3-AR表达水平的调节。 胞系中，研究PPAR-72受体对13 方法：1．从中国汉族人肾旁脂肪组织提取总RNA，应用RT．PCR eDNA基因的全长；将RT-PCR产 方法扩增出hPPAR吖2，h83一AR 物双酶切与同样进行双酶切的pcDNA3．1(+)载体连接形成重组载体 SH．SY5Y细胞中，用G418筛选获取阳性稳定转染细胞株，并用 两组：转染细胞+不加药，转染细胞+an药，同时加药组，给予不同 浓度的药物孵育，观察细胞在罗格列酮(一种特异性PPAR一／2激动 剂)处理后，133．AR蛋白表达水平的变化。 单细胞克隆。RT 明显下降，而转染突变型133．AR受体的细胞药物孵育后，受体表达 水平也显著下降，但两者问无显著差异且受体水平的下调与孵育药 物的浓度相关。 构建了人野生型和突变型的PPAR吖2、133一AR的真核表达重组体 Ⅱ 激动可以下调133-AR的蛋白表达水平。 关键词：D3一AR，PPAR-’,2，SH．SY5Y，TZDs Ili ABSTRACT we toclonethecDNA this were objective：First．instudy sequence ofhuman peroxisomeproliferator—activated andhuman and 133一adrenergicreceptor(hlB3一AR)gene(Wildtype mutant) their wereto andestablish eukaryoticexpressionvectors．Moreover,we hB3．ARandits with as thefunctionof PPAR72 investigate relationship wellastheeffectofthe 133一adrenergic thiazolidinediones(TZDs)on inculturedstablehumancellline． receptor(AR)expression fat Chinese Methods：1．The tissueof was paranephric disrupted kit．Human and RNAwas extractedTrizol