龙眼梅、美国黑李、台湾甜桃及油（木奈）PGIP基因同源克隆.pdf

独创性声明 本人声明，所呈交的学位、(毕业)论文，是在指导教师的指 导下，通过我的努力取得的成果，并且是自己撰写的。尽我所知， 除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的地方外，论文中不包含 其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献的 同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯 他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位(毕业)论文作者亲笔签名：未香琳日期：少叮．g、6 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位(毕业)论 文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借 阅；学校可以公布论文的全部内容，可以采用影印、缩印或其他 复制手段保存论文。 保密，在 年后解密可适用本授权书。 口 不保密，本论文属于不保密。 回 学位(毕业)论文作者亲等签名：来春林日期：沙哆．‘o 指导教师亲笔签名：2承j．白 日期：卯∥，-∥．6 捅建农林大学硕．HOF究生论文 摘 要 muNesiebet mei’)、荚国黑 龙眼梅(Prunus Zucc．‘longyan salicina 李(P Lindl．)、台湾甜桃(Ppersica(L)Batsch．) eta1．)都是 和油木奈(只sa]icinaLindl．Vat．corda招J．Y．Zhang 蔷薇科李属的果树，其果实既可鲜食又可加工成果干、果酱和蜜饯等，但都 面临一个问题，即采后的果实极易软化，给贮运和加]：带来一定豳难。为解 决这一问题，本研究拟通过同源克隆分离出具有抗软化、抗病虫害等功能的 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因，以构建植物表达载体，为培育抗 病、耐贮新品种奠定基础。 cDNA 本论文分别以龙眼梅、美国黑李、台湾甜桃和油木搠基因组DNA}II 为模板，根据马哈利樱桃和树莓等PGIP基因序列分别设计两对引物(A引 物和B引物)，进行PCR扩增，均得到这四种果树的基因组DNA和cDNA的多 聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因，其长度分别如下： 1)以四种植物的基因组DNA为模板．用引物A作为扩增的引物，均得到 1192bp的序列；用引物B作为扩增的引物，除台湾甜桃得到953bp的序列 外，其它均得到887bp序列； 2)以四种植物的cDNA为模扳，用引物A作为扩增的引物，均得到1045bp 的序列：用引物B作为扩增的引物，也得到806bp的序列。 所得到的核苷酸序列通过Blast分析，发现与马哈利樱桃、山杏、苹 果及梨等多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因的相似性都较高，达70％一99％。 将所得到的核营酸序列翻译成蛋白质，发现用引物A作为扩增的引物， 进行RT-PCR得到的cDNA序列有一个完整的开放读码框(ORF)．包含990 个核苷酸，编码330个氨基酸。 通过PGIPDNA和PGIPcDNA序列比较及开放读码框分析，表明PGIP 的所有DNA序列都包含2个外显子和1个内含子，且内含子都符合GT—AG 的规律。 关键词； 龙眼梅：美国黑李；台湾甜桃；油术氛多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白{PCR 同源克隆 幅建农林人学硕{‘州究生|^史 Abstract muine(Prunusrab“aeSiebetZucc．‘longyanmei’)，American Longyan plum织salicina sweet LindL