高粱雄性不育系及可育系的呼吸酶和游离全蛋白质的电泳分析1).pdfVIP

冶传 HEREDITAS(Beiiina) 2(3）． 28-30 1980 高粱雄性不育系及可育系的呼吸酶 和游离全蛋白质的电泳分析’‘ 傅鸿仪 耿玉轩 张孔t （中国科学院遗传研究所，北京） 为了探讨植物雄性不育的机理，我们在对 作均在低温条件下进行 （40C). 高粱雄性不育系及可育系 保（持系和恢复系）的 电泳 凝胶为7%聚丙烯酸胺凝胶。电 细胞学研究[2［1和细胞化学的比较研究中习〔，发现 泳仪为DYYIII型和KW67-9型，圆盘管式电 小抱子发育过程中，两者在细胞形态、酶、蛋白 泳槽。指示剂嗅酚蓝加在上槽缓冲液中，每管 质及核酸方面都存在着差异。Alam和Sandal[ 加样50微升。电泳在冰箱中进行。电流每管 研究了苏丹草花药呼吸酶和蛋白质，发现不育 2.5毫安培，电压250伏特。当指示剂误酚蓝移 系细胞色素氧化酶、过氧化物酶和蛋白质的电 到管末端时停止电泳。一般约为一小时五十分 泳区带都少于可育系。蛋白质和酶的差异是由 钟。 它们的基因直接决定的，所以研究这个问题，有 染色 细胞色素氧化酶的染色液是：1 助于对雄性不育本质的认识。1977和 1978年 毫升 1务a-蔡酚40外乙醇溶液和 1毫升 1务 我们采用了聚丙烯酞胺凝胶电泳法，对高粱雄 二甲基对苯二胺盐酸溶液与25毫升的0.1M 性不育系和相应的保持系以及恢复系，在不同 磷酸缓冲液 p（H7.劝 的混合液[6［1。于室温中保 发育时期的幼苗和不同发育时期的花药中的细 温 15-30分钟。然后置于水中清洗。过氧化 胞色素氧化酶、过氧化物酶同工酶和全蛋白质， 物酶用 Scandalios[7，染色液染色，使过氧化物酶 进行了电泳分析。所得结果报道于后。 用联苯胺显示出来。混合液为：1克联苯胺溶 于9毫升冰醋酸中，再加36毫升双蒸水，滴入 材 料 和 方 法 一滴过氧化氢。全蛋白质染色液配方为：(1) 材料 供试材料为本所农场分期播种的 1%考马斯蓝，(2)12.50%三氯乙酸，用时用 2（) 高粱雄性不育系及相应的保持系和恢复系，分 将 （1)稀释 10倍，凝胶在染色液中染色 12小 别取不同发育时期的营养体组织和不同发育阶 时以上，然后置于三氯乙酸中脱色。 段的花药。营养体组织取自萌发的胚、芽、三片 实 验 结 果 叶幼苗、六片叶幼苗、九片叶植株的生长点。花 药组织取自造抱细胞、花粉母细胞、单核花粉和 一（）细胞色素氧化酶 双核一三核花粉时的花药。 通过对高梁三系的胚、芽、三叶期幼苗、六 样品制备 取不同发育时期的花药各 叶期幼苗和九叶期植株生长点的细胞色素氧化 100毫克，加Tris一甘氨酸缓冲液 p（H8.3)1.5毫 酶的电泳分析。发现在上述各发育阶段，高粱 升，在玻璃匀浆器中研磨成匀浆。然后在 FuHongytetal.:ElectrophoresisAnalysisofRes- JANETZKIK60冰冻离心机中以1300Xg速度 piratoryEnzymesandFreeTotalProteinsfromMa- 离心15分钟，取上清液。营养体的取样量适当 le-sterileLineandMale-fertileLineofSorghum vulgare 加大，所加缓冲液也相应按比例增加。实验操 1)刘根齐、任治安、李兆据参加部分工作。 28 三系之间，细胞色素氧化酶的区带数 目无差异。 三核期，不育系有7条区带，可育系皆为8条区 胚的区带数 目三系均为 1-2条。