利用多重PCR反应同时筛选番茄Ty-1和cf-5基因.pdfVIP

上海农业学报 2009，25(2)：6—9 ActaAgriculturaeShanghai 文章编号 ：1000—3924(2009)02-06．04 利用多重 PCR反应 同时筛选番茄 Ty一1和 c一5基因 于 力 ，朱龙英 ，万延慧 ，杨少军 ，张 辉 ，朱为 民 (上海市农业科学院园艺研究所 ，上海 201106；上海市设施 园艺技术重点实验室，上海 201106) 摘 要 ：利用同一 PCR反应体系同时扩增、筛选分别与番茄抗黄化 曲叶病毒病 的 一1基 因和番茄抗叶霉 病 的c厂_5基因紧密连锁 的SCAR标记 ，扩增的特异性片段与单引物扩增片段完全吻合。与 Ty．1基 因紧密连锁 的SCAR1标记为共显性标记 ，抗感材料均产生 398bp的特异片段 ，纯合和杂合抗病基因型存在 TaqI酶切位 点，酶切后分别产生了303bp和 95bp以及 398、303bp和95bp的特异性片段 ，而感病基 因型无此酶切位点，酶 切后仍呈现 398bp的特异带 。与 5基 因紧密连锁的SCAR2标记扩增后抗感材料均产生 960bp的特异片 段 ，用限制性 内切酶 TaqI酶切后 ，含 c，-5基因的材料产生一条 256bp的特异带，而不含 c，．5基因的材料产生一 条 225bp的特异带 。 关键词：番茄；分子标记；多重PCR；『y．1；cf．5 中图分类号 ：$436．412 文献标识码 ：A IdentificationofTy。1andcf-5genesoftomatobymultiplexPCR YULi ，ZHULong—ying，WANYan-hui，YANOShao-jun，ZHANGHui，ZHUWei-min’ (HorticulturalResearchInstitute，SAAS，Shanghai201106，China；ShanghaiKeyLaboratoryof ProtectedHorticulturalTechnology，Shanghai201106，China) Abstract：ThetwoSCAR markerstightlylinkedrespectivelywiththery一1generesistanttotoma- toyellowleafcurlvirusandthecf一5generesistanttotomatoleafmoldwereamplifiedandscreened bythesamePCR system ．Thespecificfragmentamplifiedwasidenticalwithoneamplifiedbyasingle SCAR primer．TheSCAR1markertightlylinkedwith Ty一1genewascodom inantandallthematerials producedaspecificfragmentof398bp．AfterdigestedbyTaqI，thehomozygousry-1genotypecould produce303bpand95bpspecificbands，andtheheterozygousonecouldproduce398，303bpand95bpspe- cificbands，butthediseasesusceptiblegenotypestillpresenteda398bpspecificband．Afteramplified， theSCAR2markertightlylinkedwithcf-5geneproduced960bpspecificfragmentinbothresistant andsusceptibletomatolines．AfterdigestedbyTaqI，thematerialwithcf-5genecouldproducea256bpspe— cificband，butthematerialwithoutcf一5geneproduceda225bpspecificband．Thereplicatedtests provedthatthetwo resistantgenescouldbeidentifiedsimultaneouslybythesamePCR system ． Keywords：Tomato；Molecularmarker；Multip