植酸酶和甘露聚糖酶双功能毕赤酵母工程菌的构建和产酶分析.pdfVIP

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2017-09-04 发布于重庆
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植酸酶和甘露聚糖酶双功能毕赤酵母工程菌的构建和产酶分析.pdf

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卷期 ! # 微生物学报 !（）： # #%$ #%! 年月日 #$$ ! ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! ’()*+ #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 植酸酶和甘露聚糖酶双功能毕赤酵母工程菌的构建和产酶分析黄生平，汪昌丽，张桂敏，马立新（湖北大学生命科学学院分子微生物与基因工程研究室武汉 !-$$,# ）摘要：根据已发表的植酸酶基因和甘露聚糖酶基因序列设计并合成引物，应用EFG 技术，分别以土曲霉总HI’ 和质粒为模板，扩增出均不含假定信号肽序列的植酸酶基因和甘露聚糖酶基因，将它们各自 (J/K.#$. !#$ %’ 克隆到毕赤酵母表达载体 (J/K4$F 上，分别得到重组质粒 (J/K4$F3!#$ 和 (J/K4$F3 %’ 。将质粒上由乙醇氧化酶（）启动子和终止子引导表达、酿酒酵母信号肽序列引导分泌的表达 (J/K4$F3!#$ ’LM. ! !#$ 盒式结构插入到质粒 (J/K4$F3 %’ 中，构成双基因表达分泌质粒 (J/K4$F3!#$3%’ 。(J/K4$F3!#$3%’ 经酶切线性后转化毕赤酵母（），获得了同时分泌表达植酸酶和甘露聚糖酶的双功能酵母工程 () *+,+ ! -./0+- NO..0 菌。研究了该酵母工程菌所分泌表达的重组植酸酶和甘露聚糖酶的相关酶学性质，并进行了双功能酵母工程菌的稳定性测试。关键词：植酸酶；甘露聚糖酶；毕赤酵母；共表达中图分类号：文献标识码：文章编号：（） P4-- ’ $$$.3,#$4 #$$ $#3$#%$3$0 植酸酶（；）是催化植酸（即肌熟，这使得该酵母在饲料添加剂上具有广阔的前 EQ6D2 8F- R .R- R % ［］醇六磷酸）及植酸盐水解成肌醇与磷酸（或磷酸盐）景0 。目前，利用 * ? !-./0+- 表达系统单独表达植［］ , 的一类酶的总称。植酸酶作为一种单胃动物的环保酸酶或者甘露聚糖酶的例子很多，例如：姚斌等将型饲料添加剂，它的饲喂效果已在世界范围内得到来源于$-!102+))3- ’+210 4,- 的植酸酶基因经定点突