细胞工厂培养轮状病毒基因重配株 Ls(G3型)条件的优化研究.pdfVIP

细胞工厂培养轮状病毒基因重配株 Ls(G3型)条件的优化研究.pdf

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微生物学免疫学进展 2014年2月第 42卷第 1期 ProginMicrobiolImmunol,Feb.2014.V01.42No.1 ·25 · · 论 著 · 细胞工厂培养轮状病毒基因重配株 Ls (G3型)条件的优化研究 安红 ,张海红 ,Y-.g强 ,韩平’,余黎 ,周旭 1.兰州生物制品研究所有限责任公司 甘肃省疫苗工程技术研究中心,甘肃 兰州 730046; 2.上海生物制品研究所有限责任公司,上海 200052 摘要:目的 以细胞工厂代替转瓶培养轮状病毒基因重配株 Ls的可行性研究。方法 采用细胞工厂与相应的转 瓶培养工艺作对比,比较两种容器内细胞生长状态与病毒收获液滴度,并对细胞工厂培养条件进行 了优化。结 果 以相同浓度接种细胞时,细胞工厂4d长成单层 ,转瓶却需要7d,经细胞仪计数后单位面积内细胞密度相当; 以相同MOI接种病毒后 ,转瓶内的病毒于第7天病毒滴度达到峰值,细胞已完全脱落;细胞工厂于第3天病毒滴度 达到峰值 ,并实现了3次收获。细胞工厂每次收获的病毒液滴度都稳定在一定范围,与转瓶相当。另外,细胞工厂 培养条件优化结果表明,Vero细胞最佳接种浓度为3.0×10细胞/cm ,接种病毒的最适 MOI为0.02~0.04。结 论 使用细胞工厂培养Ls株病毒不仅提高了效率 ,而且减少了培养空间,可替代转瓶规模化生产轮状病毒疫苗。 关键词 :轮状病毒;~ero细胞;细胞工厂;病毒滴度 中图分类号:R373.2 文献标志码:A DOI:10.13309/j.cnki.pmi.2014.01.006 Optimization ofconditionsforculturingthereassortant rotavirusesstrainLs(G3type)oncellfactory AN Hong,ZHANG Hai—hong,WANG Mingqiang,HAN Ping,YuLi,ZHOU Xu LanzhouInstituteofBiologicalProductsCo.-Ltd.,CenterforGansuProvincialVaccineEngineeringResearch, Lanzhou730046,GansuProvince,China Correspondingauthor:ZHOUXu.E—mail:kathzhou@ sina.corn Abstract:Objective ToestimatethepossibilityofculturingthereassortantrotavirusesstrainLsonacellfactoryinstead ofaconventionalrollerbottle.M ethods Thegrowthsofcellsandtitersofharvestedvirusculturedbythetwomethods werecompared.Furthermore,theconditionforcultureonthecellfactory wasoptimized.Results Theresultsindicate thatthemonolayerisfomr edonthesurfaceofthecellfactory within4dofcultivation,butonthesurfaceoftherollerbottle within7d。whentheVerocellsareinoculatedatthesamecellconcentration.Wefoundthatthecelldensityoftwocontain— ersisequal byusing

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