辛酸沉淀结合阴离子交换层析纯化马IgG的研究.pdfVIP

技术与方法学 辛酸沉淀结合阴离子交换层析纯化马 的研究 杨俊杰段丽娟金学敏张 金 兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心兰州 摘要 目的以辛酸沉淀结合离子交换层析纯化破伤风抗毒素马免疫血浆获得高质量的马 为 抗毒素 的制备奠定基础 方法通过对辛酸沉淀马血浆过程中的辛酸浓度以及血浆稀释倍数 的实验设计 研究不同条件对纯度效价 比活性 浊度以及过滤速度的影响确定各工艺参数的 可操作区间并结合 阴离子交换层析以流穿模式进一步纯化 结果马血浆经一步辛酸沉 淀获得的纯度 大于 液相色谱 纯度大于 比活性较血浆提高 倍辛酸沉淀后的样品经离子交换层析可有效去除聚合体以及小分子杂质将纯度提高至 和 结论马血浆经辛酸沉淀和阴离子交换层析可获得高纯度高比活的 关键词 破伤风抗毒素辛酸离子交换层析实验设计 抗毒素系由相应抗原免疫马匹所得的血浆经 生以及增加细菌内毒素污染的风险 近年来一 一系列纯化制成的球蛋白制剂其本质为马源抗体 些新的纯化方法相继被应用到抗毒素纯化的研究 或 片段 目前大多数的厂 和或生产中包括辛酸纯化亲和层析离子交换层 家采用的抗毒素生产工艺是硫酸铵沉淀法但该方 析等 辛酸是一种饱和脂肪酸在低 条件下辛 法耗时长工作量大并且会导致聚集体聚合体的产 基的疏水作用促使血浆中的酸性蛋白发生沉淀如 白蛋白 而等电点较高的分子则具有足够的电 应的 然后缓慢加入辛酸使其终 荷以中和辛基的疏水作用得以保留在上清液中 浓度至 于常温 剧烈搅 世纪 年代有研究证实了辛酸纯化马源 拌 之后静置 混悬液经双层滤纸过滤滤过 的可行性并相继探讨了影响辛酸沉淀的各种条件 液以 调 至 包括温度辛酸浓度搅拌强度等 通过条件 阴离子交换层析 的优化取得了良好的纯化效果因辛酸纯化较硫酸 平衡缓冲液为 洗脱缓 铵沉淀法具有操作步骤简单省时省力成本低廉等 冲液为 首 优点在抗毒素的纯化研究中得到了广泛的应用 先将预先装填 介质的层析柱 近年来随着层析技术的发展离子交换层析也 用平衡缓冲液充分平衡然后将 中辛酸