过量表达URO基因提高拟南芥抗旱能力.pptVIP

过量表达URO基因提高拟南芥的抗旱能力 背景介绍 拟南芥uro突变体中由于URO（UPRIGHTROS ETTE）基因的过量表达导致生长素含量明显提高。本文结果表明，uro突变体的抗旱能力明显强于野生型，但uro突变体的根长、表皮毛数目以及离体叶的脱水速度都没有优于野生型。uro突变体对外源ABA不敏感, 且在uro突变体中ABA响应基因的表达与野生型相比显著推迟。另外，表型分析表明uro突变体的营养生长延长, 植株衰老延迟，特别是经过渗透胁迫后，uro植株内的丙二醛含量低于野生型。由此可见，URO基因的过表达使uro突变体通过ABA非依赖途径提高了抗旱能力，而uro突变体衰老延迟可能与其干旱抗性提高有关。 植物抗旱的方式 1、调节气孔开关，减弱蒸腾作用，减少水分流失。 2、调节根系发育，抵抗干旱环境。 3、植物会产生一些渗透物质，如蔗糖等。调节细胞渗透势，抵抗干旱。 4、相应水分胁迫信号，主动调控相关基因的表达来抵抗干旱。 植物抗旱胁迫途径 1、ABA依赖型（较多） 基因的表达受ABA诱导，包括NAC(RD26)途径、AREB/ABF途径和MYB/MYC途径。 2、ABA非依赖型 基因的表达不受ABA诱导 DREB1,2途径和NAC-eRD1途径 ABA：脱落酸 试验方法、现象、结果 一、方法：正常条件培养野生型和uro突变体3周，浇水后连续21天不浇水，此后给与复水处理。 目的：A 观察植物表形状态 B 统计根的长度与数目、表皮毛数 目 1、从图2可知，uro突变体根的长度及数目，还有表皮毛的根数都少于野生型。可见uro的表形抗旱能力低于正常野生型。 2、可以断定，uro突变体并不是通过改变其表形来增加其抗旱能力。 二、方法：取土壤中生长3周的野生型和uro突变体各10株，测定前充分吸水。去根后，将地上部分室温条件下干燥。每隔20min测定一次至离体200min。最后于180℃烘干2小时再测定干重。 目的：A 测定植物的保水能力 1、通过连续不断的高温处理，uro突变体含水量下降很快。失水量大于野生型。 2、说明uro突变体并不是通过提高细胞保水能力来增强耐旱性的。 三、ABA敏感性实验： 方法：将拟南芥种子消毒后，于4℃放置3天。然后置于23℃，24小时，光下竖直培养4天。移栽到分别含有0、0.1、1、10 umol/L ABA的1/2 MS平板上。顺时针旋转90度后，竖直培养6天。用游标卡尺测量幼苗主根长度。每组样本数30个。并测定丙二醛的含量。 目的： A 检测uro基因是否对ABA敏感 四、检测ABA响应抗干旱基因 方法：1将在1/2MS培养基上竖直培养4 d的野生型 幼苗分别移栽到1/2MS培养基、1/2MS+100μmol·L-1ABA、1/2MS+300 μmol·L-1甘露醇的平板上，于正常条件下继续培养2 h后，提取植物组织RNA，检测URO基因的表达情况。用未移栽植物提取的RNA作为0 h未移栽对照。 1、ABA和甘露醇处理抑制URO基因的表达，暗示URO基因所调控的生长发育过程与ABA和甘露醇造成的胁迫环境是相互拮抗的。 方法2、将从1/2MS培养基移栽到另一1/2MS培养基之后立即提取的RNA, 作为0 h移栽对照; 将移栽到1/2MS培养基2 h后提取的RNA, 作为2 h移栽对照; 以ACtiN基因作为内源稳定表达基因对照, 以受干旱诱导表达的标记基因RD29A作为胁迫诱导基因阳性对照, 以检测URO基因的表达变化。 野生型Ler中, ABA诱导的基因表达都大约在处理后2 h时最强，之后逐渐减弱；而在uro突变体中，这些基因也响应了ABA胁迫，但是最强表达高峰出现的时间推迟到处理后8 h左右。 结 论 1、uro突变体抗干旱胁迫能力强于野生型。 2、从形态学分析，uro突变体并没有抗旱的优势。 3、uro突变体对外源ABA的敏感性降低。 4、uro突变体营养生长延长，衰老延缓。 5、uro突变体可能是通过ABA非依赖途径来抵抗干旱。 6、URO基因的过量表达促使自由态生长素浓度升高。而生长素能够促进植物生长，抑制衰老，这可能是uro突变体能够抵抗干旱的原因。 研究的目的和意义 本研究结果为进一步理解生长素在植物抵抗干旱胁迫过程中的作用提供了有价值的信息。利用生长素信号途径中的抑制衰老相关基因进行遗传育种, 有可能为提高作物的抗旱能力提供新的方法。 * 野生型