蚤类染色体的制片方法及分带技术.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Bcijing)12(6)-32-331990 实验技术 与方法 蚤类染色体的制片方法及分带技术” 曹丽萍2) 何 麟 （第一军医大学寄生虫学教研室，广州，510516) 本文首次介绍了蚤类染色体的空气干燥制片方法和分带技术。以蚤成熟三龄幼虫和成蚤生殖腺为 材料，采用体外短期培养、空气干燥、Giems‘染色技术制片，具取材容易、操作简便、中期分裂相多且 染色佳、标本不需封片即可长期保存等优点，克服了以往醋酸地衣红压片法染色体分散不佳、杂质多、染 色易褪色及标本需封片才能保存等缺点。在印鼠客蚤等四种蚤的染色体研究中均获得满意效果，成功率 高，重复性好，尤以生殖腺染色体制片成功率为 100肠。在此基础上还摸索建立了蚤类染色体的C一分 带、G一分带和银染技术。 关键词：蚤，染色体，分带 蚤类染色体研究不论就其本身种类而言， 还是与其它医学昆虫相比可谓微乎其微，国内 一、染色体常规制作技术 尚未见到有关文献，国外仅报道了6种蚤的染 一（）幼虫脑组织染色体制片法 （图版I,a) 色体数目和减数分裂观察的结果4,〔91，未作核型 1．培养 挑取健壮活跃的成熟幼虫，用 分析和分带研究，追其原因染色体制作技术的 含青、链霉素的Ringer氏液洗3次，用解剖 落后是一个重要方面。以往蚤类染色体制作是 针在虫体第3-4节间切断，取头前端置于含 以幼虫生殖腺、肢芽组织和虫卵为材料，沿用醋 15%小牛血清和抗菌素的Ringer氏液或 酸地衣红等染料的压片法，，，］〔，该法主要缺点是 RPMI-164。培养液中，再加人秋水仙素使其最 细胞和染色体分散不佳、背景杂质多，影响观察 终浓度为 70-100Fzg/ml,250C恒温箱培养 计数和显微照相；染色易褪色、标本需封片才能 3-4小时。 保存且中期分裂相不多，成功率低。我们参考凌 2．低渗 吸弃培养液，加人新配制的预 发瑶[i1,Dybanlb〕等介绍的其它昆虫和动物染色 瘟至25℃的10%o柠檬酸钠溶液；25℃低渗 体制作方法，摸索和建立了适合蚤类的染色体 30-50分钟，中间换液 1次。 空气干燥制作法。该法以蚤成熟三龄幼虫脑组 3．固定 吸弃低渗液，加人新配制的甲 织和成蚤生殖腺为材料，采用体外短期培养、 醇冰醋酸 3（:1)液，4℃固定1-2小时，中101换 空气干燥，Giemsa染色技术制片，具取材容 液2次。固定时间稍长或冰箱过夜对制片无不 易、操作简便、中期分裂相多、成功率高且标本 良影响。 不需封片即可长期保存等优点，在印鼠客蚤等 CaoLipingetal.:Air-dryingandBandingTech- 4种蚤的染色体研究中均获得理想的结果，在 niquesforFleasChromosomePreparation 此基础上还建立了较满意的蚤类 C,G一分带和 1)印鼠客蚤、秃病蚤蒙冀亚种由军事医学科学院五所和 银染方法，为蚤类染色体的研究提供了新的技 内蒙古流行病防治研究所提供，特此致谢。 2)现在广州军区总医院血液室工作，邮政编码5100100 术手段。现介绍如下； 本文于1989年11月13日收到。 4．解剖制片 吸弃固定液，滴加60并醋 EDTA混合液 （1:1)，轻轻摆动60秒左右。混 酸处理30分钟以软化组织，然后在解剖镜下小 合液用 3% Tris调 pH7.0左右。 PBS(pH 心分离出脑神经组织，耐心细致地撕拉转磨，使 6.8）漂洗2-3次，晾干。 细胞充分散开，空气干燥。 3．染色，1:20的 Giemsa液染色 15-20 5．染色 用 1/15MolZml磷酸缓冲液 分。 (pH6.8-7.0