脉冲标记DNA复制和细胞周期测定的的研究.pptVIP

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2017-09-04 发布于安徽
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脉冲标记DNA复制和细胞周期测定的的研究.ppt

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关于细胞周期长短测定的研究作者：RichardFantas 脉冲标记法是一种建立较早且被广泛采用的方法，这种方法主要适用于细胞种类构成简单、细胞周期相对较短，周期均匀的细胞群体。用3H-TdR短期饲养细胞，然后置换新培养液继续培养，之后每隔一段时间进行放射自显影观察分析，确定处于某一时期的细胞数量，进而确定细胞周期各个时相的长短 L1又可以平移到右侧L3 那么计算S期的公式将有如下的三个： 1.Ts=M期细胞总数到最大值的一半，经历到最大值，再下降到一半所用的时间 2.Ts=先头细胞先到达M期，再上升到最大值，最后即将下降所用的时间 3.Ts=先头细胞刚上升到最大值，再下降到最小值所用的时间而且看起来公式2和3要比公式1简单许多，因为最大值的一半不好找，而上升和下降的拐点则容易找因而对于如下的三个计算S期的公式： 1.Ts=M期细胞总数到最大值的一半，经历到最大值，再下降到一半所用的时间（时刻准确） 2.Ts=先头细胞先到达M期，再上升到最大值，最后即将下降所用的时间（在特殊情况下准确） 3.Ts=先头细胞刚上升到最大值，再下降到最小值所用的时间（在特殊情况下准确）因此虽然公式1比较麻烦，但是得出的结论符合一般情况，而公式2和3只有在特殊情况下（即假设细胞分布的图像是轴对称图形）才能够成立。而且观察图线虽然容易得到拐点，但是拐点处斜率变化很大，取值精确度低，而在50%左右的地方，斜率变化趋于平缓，此时取值更为准确。考虑到实验的准确性和正确性，应当取公式1 同时我们也应当牢记其余的几个公式，下面再复习一遍【TG1=Tc-(TM+Ts+TG2)】敢竭鄙怀，恭疏见解，请洒潘江，各倾陆海云尔。谢谢观赏！ * S期的细胞被3H-TdR标记，假设之后各个细胞周期相同，且不同细胞细胞周期运转速率相同则如图所示，可认为淡蓝色图形为所有的细胞（横向代表时间，纵向代表细胞个数） S期 G2期 M期时间细胞个数标记细胞经过时间的推移，我们来看看标记细胞最前面的进入了哪个时期先头细胞 G2期 M期时间细胞个数标记细胞 G2期所占时间TG2 细胞开始进入M期先头细胞进入M期带标记的分裂细胞个数时间 G2期 M期时间细胞个数重叠面积达到最大未进入M期的标记细胞先头细胞进入M期末期 M期所占时间TM 带标记的分裂细胞个数时间 TM G2期 M期时间细胞个数带标记的分裂细胞个数时间先头细胞达到最大值的50% 后尾细胞达到最大值的50% S期 S期所占时间Ts TS G2期 M期时间细胞个数带标记的分裂细胞个数时间 G1期 S期下一细胞周期先头细胞达到最大值的50% G2期先头细胞达到最大值的50% 整个细胞周期TC M期间期先头细胞正好经历过整个周期 TC 到这里，突然出现一个问题，由求Ts的图可以看出直线1和直线2的长度相等，可以平移带标记的分裂细胞个数时间 L1 L2 带标记的分裂细胞个数时间 L1 L3 S期 G2期 M期时间细胞个数其实这是因为我们假定处在S期中各个时期的细胞个数相等。如果不相等，则如下图所示标记细胞 G2期 M期时间带标记的分裂细胞个数时间先头细胞达到最大值的50% 后尾细胞达到最大值的50% S期 S期所占时间Ts TS 这里的图像便不是原来对称的等腰梯形了！！ G2期 M期时间先头细胞达到最大值的50% 后尾细胞达到最大值的50% S期不轴对称图形的等面积分线不在底边中间，因而分底边所得的两条线段不相等！带标记的分裂细胞个数时间 L1 L2 结合上一张图，可以得出这里L1不等于L2 时间间期 TC TM TS