d-柠檬烯对人胃癌mgc803细胞增殖和凋亡的影响期刊.pdfVIP

研究报告 生命科 学仪器 2009第7卷 ／1月刊 D一柠檬烯对人胃癌MGC803~$胞增殖和凋亡的影响 王玲 张秀珍 (山东理工大学生命科学院 山东淄博 255049) 摘要 目的研究D一柠檬烯对人 胃癌MGC803细胞生长抑制和凋亡的影响。方法 噻唑蓝 (MTT)法比色检测细胞生 长情况；流式细胞仪检测细胞凋亡率；激光共聚焦检测细胞内活性氧 (reactiveoxygenspecies，ROS)的含量和caspase一 3蛋白的表达。结果D一柠檬烯对人胃癌MGC803细胞生长抑制作用呈剂量依赖关系；流式细胞仪检测发现D一柠檬烯 可引起MGC803细胞凋亡，且呈时间依赖性；激光共聚焦显微镜荧光检测发现D一柠檬烯处理的细胞内ROS明显升 高 (P0．05)，caspase一3蛋白表达明显增加 (P0．05o结论D一柠檬烯能够有效地抑制癌细胞的生长以及诱导凋 亡，这种作用机制可能是使MGC803细胞内产生大量的活性氧，也可能与细胞内easpase一3基因的表达变化有关。 关键词 D一柠檬烯；人 胃癌MGC803细胞；凋亡 D一柠檬烯是一种天然的功能单萜，主要存在于 1-3主要仪器激光共聚焦显微镜 (Leica公司)； 柠檬油、柚子油、佛手油等精油中，这些植物在我国 C02培养箱 (Kendro公司)；酶标仪 (Thermo公司)； 分布较广。食品工业常将D一柠檬烯作为添加剂。D一 倒置显微镜 (Nikon公司)；流式细胞仪 (Becton— 柠檬烯的分子质量136．23，毒性属GRAS(一般公认安 Dickinson公司)等。 全)级，具有抗氧化、抗炎、利胆溶石等作用lh2]。近 年来研究发现，D一柠檬烯具有较好的预防和抑制肿 2实验方法 瘤活性，在预防和治疗乳腺癌、肺癌、皮肤癌、肝癌 2．1人 胃癌MGC803细胞的培养MGC803细胞培养 等均取得了良好的效果 4】。胃癌是消化系统最常见的 基为含有15％新生牛血清、lOOU／ml青霉素和100U／ml 肿瘤，其发生和演化是一个多步骤、多基因参与的复 链霉素的1640培养基，培养于37℃、5％CO，叵温饱和 杂过程，目前抗 胃癌治疗研究的热点在于如何调控细 湿度培养箱。每隔48h换液，待细胞将长满时，使用 胞凋亡。路小光[提出，增加p53与bax及降低bcl一2 0．25％胰酶消化，进行传代培养。选择处于对数生长 蛋白表达是D一柠檬烯诱导SGC一7901，BGC一823，AGS~． 期的癌细胞计数板计数，调整细胞密度为1X106m／l进 种不同类型的人 胃癌细胞株凋亡可能的机制。Caspase 行各项实验。将细胞分为两组，空白对照组和实验组。 蛋白酶的级联激活是细胞凋亡过程的主要环节，在 胃 实验组中加入不同浓度的D-柠檬烯梯度为0．5mmol／L、 癌细胞中，easpase一3介导的信号转导途径是否会受D一 0．625mmol／L、0．75mmol／L、1mmol／L，每种浓度设 柠檬烯的影响还未知。因此，