试验 植物营养原理.pptVIP

实验 缺磷特异诱导基因表达的检测 1）材料培养： 低磷和正常磷条件下水培油菜（或拟南芥）； 2）提取根或地上部总RNA 3）总RNA质量和浓度检测 4）总RNA反转录为cDNA 5) 基因特异引物扩展特异基因 原 理 ? 模板cDNA????? ? ?? 2 μl??????? 上游引物（10 pM）??? 1 μl??????? 下游引物（10 pM）??? 1 μl??????? dNTP(10 mM)??????? ? 1 μl??????? buffer???? 2 μl Mg2+ 1.2 μl??????? Taq 酶（2u/μl）?? ? 0.4 μl ?ddH2O， 使总体积达 20 μl PCR反应体系 94° C 55° C 72° C Polyermase-chain reaction (PCR) to amplify DNA 94° C 55° C 72° C 94° C 55° C 72° C 94° C 55° C 72° C Polyermase-chain reaction (PCR) to amplify DNA 1 → 2 → 4 → 8 → ··· → 2n (n 次循环) 28s 18s 总RNA电泳图 5s 油菜响应低磷胁迫特异表达的基因 1）避免RNA酶污染 操作过程中应始终戴一次性橡胶手套，并经常更换，以防止手、臂上的细菌和真菌以及人体自身分泌的RNA酶带到试管或污染用具， 避免在操作中说话聊天。 2）注意实验安全 TRIzol、DEPC、EB、甲醛均为有毒物质，不要与皮肤有直接接触，注意防护。 注意事项