Leber氏病的PCR基因诊断.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Bering)14(5);18- 19 1992 Leber氏病的PCR基因诊断＊ 张丽珊 黄 鹰 朱 斌 王世浚 张志平 李方园 南（京铁道医学院生物教研室，210009) 高静娟 童 绎 福（建医学院眼科教研室，福州 350005) 木文报告了用 PCR技术对线拉体 DNA突变引起的人类 Leber氏病 的研究。此病惠者 的 mtDNA第11778位由G突变成A，这种点突变使 sfaNI酶识别位点消失，因此可通过 PC1t扩增此特 异片段确定其酶切多态性。我们扩增了含 sfaN1酶切识别位点在内的一段340bp的mtDNA,sfaNI酶 将正常人的mtDNA切成 190师 和 150bp两片段，而患者的mtDNA则保留完整的 340bp, 关键词：线粒体DNA,PCR,Leber氏肩 人类细胞中有一种非常小但很基本的核外 于mtDNA单个碱基突变引起的[6,12.131。从而 遗传成分— 线粒体 DNA (mitochondrial 在我国首次开创了用 PCR方法研究核外遗传 DNA,mtDNA)，它构成线粒体基因组。人 物质与人类疾病间关系的新领域。 mtDNA为16569bp的闭环双链 DNA 分 子37〔。 目前有关 mtDNA的基本结构已搞清 材 料 和 方 法 楚，其完整的限制酶谱及 mtDNA的 RFLP （一）Leber氏病患者的外周血由福建 医 资料也已建立 “,3,1,9,107。但对于线粒体突变与人 学院眼科教研室童绎教授提供，两个患者来自 类疾病关系的研究却远远落后于人们 对核 不同的家系。患者 1，何XX,22岁，男性，双眼 DNA的遗传疾病的认识。 近两年来，随着 前指数，双视神经乳头色泽苍白，境界清晰，视 DNA分子杂交技术，尤其是PCR技术的应用 网膜小动脉普遍细小，其它无异常。患者2，翁 和发展，使人们对 mtDNA的研究取得 了突 XX，35岁，女性，双视力0.04，眼底同上例。 破性的进展。 1988年 Holt和 Zeviani等人 按常规法提取外周血 白细胞 DNA （内含 mt 先后在线粒体脑肌病患者的肌肉中发现了 DNA)，取0.3Esg作为模板 DNA,, mtDNA的缺失，缺失的片段从lkb到 7kb不 二（）PCR扩增采用Perkin-Elmer/Cetus 等5.〔151。 同年Wallace又在Leber氏遗传性 试剂盒 （含 AmpliTaqDNA 聚合酶） 视神经病 (LebersHereditaryOpticNeuro- 三（）PCR扩增所用的一对引物分别为： pathy,LHON）患者的 mtDNA 中发现了 5-AGCCCTCGTAGTAACAGCCA一3 tntDNA单个碱基的突变Vi[。此后线粒体 DNA (L链，11641一11660) 突变与人类疾病的关系愈来愈受到人们 的注 5-GGAGTATAGGGCTGTGACTA一3 视。 (H链 11980一11961） 我们用 PCR技术对 Leber氏病患者 的 ZhangLishaqetal.:GeneDiagnosisofLebera mtDNA与正常人的mtDNA进行 了比较分 HereditaryOpticNeuropathywithPCR ＊国家 自然科学基金资助课题。 析，证实了Wallace等人提出的认为此病是由 本文于1991年5月10收到。 18 引物量为25pmol，循环反应第一次95℃变性 M 1 2 3 4 5 6 ，，分钟，55℃复性 1分钟