出口食品中大肠菌群和大肠杆菌快速计数法 Petrifilm测试片法.docVIP

前 言 本标准代替SN/T 1896-2007。 本标准与SN/T 1896-2007相比，主要修改如下： ——修改了标准的中英文名称； ——修改了全文中Petrifilm?测试片名称； ——删除了第二法 Petrifilm? 测试片MPN法； ——删除了附录A。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局 大连启元科技发展有限公司 本标准起草人：刘淑艳 丁健 吕佳 蒋丹 孙晓飞 万超 吴斌 林长军 王刚 卢行安 周振亚 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： ——SN/T 1896-2007。 食品中大肠菌群和大肠杆菌快速计数法－冷水可溶性凝胶冷水可溶性凝胶测试片法。 本标准适用于食品和原料中大肠菌群和大肠杆菌的计数，也适用于表面的卫生检测。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 SN0169 出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法 原理 冷水可溶性凝胶含有VRB (Violet Red Bile) 培养，冷水可溶性凝胶和TTC）指示剂，可增强菌落计数效果。表面覆盖的胶膜，可发酵乳糖的大肠菌群产生的气体冷水可溶性凝胶含有VRB培养，冷水可溶性凝胶和指示剂，可增强菌落计数效果。绝大多数E .coli（约占97%）能产生(-葡萄糖酸酶与培养基中的指示剂反应，产生蓝色沉淀环绕在大肠杆菌菌落周围表面覆盖的胶膜，可发酵乳糖的大肠菌群产生的气体设备和材料 恒温培养箱：36 ±1(C。 均质器（旋刀式或拍击式）或等效的设备。 pH计或精密pH试纸。 冷水可溶性凝胶测试片压板。 放大镜菌落计数器冷水可溶性凝胶培养基和试剂 无菌生理盐水：称取8.5ｇ氯化钠溶于1000 mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。 1 mol/L NaOH：称取40g NaOH溶于1000 mL蒸馏水中。 1 mol/L HCl：移取浓盐酸90 mL，用蒸馏水稀释至1000 mL。 冷水可溶性凝胶大肠菌群测试片。 冷水可溶性凝胶大肠杆菌/大肠菌群测试片。 检验程序 检验程序 冷水可溶性凝胶操作步骤 样品制备 按照SN0169方法进行样品制备。制备的1:10样品匀液，无菌操作调节样品pH为6.5～7.5，酸性用 NaOH调节，碱性用HCl调样品匀液的接种和培养 对上述样品匀液做10倍系列梯度稀释，根据样品的污染程度，选取适宜的2～3个连续稀释度，每个稀释度接种2张测试片。 接种：将冷水可溶性凝胶大肠菌群测试片或大肠杆菌/大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用吸管吸取1 mL样液垂直滴加在测试片的中央，将上层膜缓慢盖下，避免气泡产生和上层膜直接落下，把压板（平面底朝下）放置在上层膜中央，轻轻地压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上。拿起压板，静置至少1 min以使培养基凝固。 培养：将测试片的透明面朝上水平置于培养箱内，堆叠片数不超过20片，培养温度为36(C(1(C。大肠菌群检测时培养时间为24h ( 2h；大肠杆菌检测时，如果是肉、家禽和水产品培养时间为24h ( 2h，如果是其它产品，培养时间为48h ( 2h。 表面检测的操作步骤 培养基准备：用1mL无菌稀释液水化冷水可溶性凝胶将测试片的透明面朝上水平置于培养箱内，堆叠片数不超过20片，培养温度为36(C(1(C。大肠菌群检测时培养时间为24h ( 2h，大肠杆菌检测时培养时间为48h ( 2h。 结果计算与报告 判读 目视、用菌落计数器、放大镜来计数培养圆形面积边缘上及边缘以外的菌落大量气泡，不明显小菌落培养区呈暗红色，进一步稀释样品获得准确的读数。蓝色有气泡的菌落确认为大肠杆菌。培养圆形面积边缘上及边缘以外的菌落不计数出现大量气泡形成不明显的小菌落，培养区呈蓝色暗红时，进一步稀释样品获得准确的读数。计数菌落数大于150个时，可计数一个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成单个方格内的菌落数后乘以0即为测试片上估算的菌数圆形生长面积为0 cm2）。食品中最终菌落浓度的单位以“CFU/g (mL)”表示，表面上菌落数以“CFU/cm2”表示。 参考文献 AOAC. Official Method 990.14. Coliforms and Escherichia coli Counts in foods Dry Rehydratable Methods (Petrifilm E.coli Count Plate and Petrifilm Coliform Count Plate) Met