出口食品中金黄色葡萄球菌的快速计数法 Petrifilm测试片法.docVIP

前 言 本标准代替SN/T 1895-2007。 本标准与SN/T 1895-2007相比，主要修改如下： ——修改了标准的中英文名称； ——修改了全文中Petrifilm?测试片名称； ——删除了第二法 Petrifilm? 测试片MPN法；相应修改了方法的使用范围； ——删除了附录A。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局 本标准起草人：蒋丹 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： ——SN/T 1895-2007。 食品中金黄色葡萄球菌快速计数法－冷水可溶性凝胶冷水可溶性凝胶 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 SN 0172 出口食品中金黄色葡萄球菌测定方法 原理 冷水可溶性凝胶Staph Express Count Plate, STX) 是一种预先制备好的快速检验系统。它含有具有显色功能并经改良的Baird-Parker培养基，对金黄色葡萄球菌具有很强的选择性，并含有冷水可溶性凝胶。测试片上的紫红色菌落为金黄色葡萄球菌。当测试片上出现除紫红色以外的其它任何颜色(如黑色或蓝绿色)，则必须使用确认反应片。此确认反应片含有显色剂和脱氧核糖核酸(DNA)。金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶(DNase)会和反应片中的显色剂形成粉红色晕圈。 设备和材料 恒温培养箱：36℃±1℃。 均质器（旋刀式或拍击式）或等效的设备。 pH计或精密pH试纸。 放大镜菌落计数器。培养基和试剂 无菌生理盐水：称取8.5ｇ氯化钠溶于1000 mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。 1 mol/L NaOH：称取40g NaOH溶于1000 mL蒸馏水中。 1 mol/L HCl：移取浓盐酸90mL,用蒸馏水稀释至1000 mL。 冷水可溶性凝胶金黄色葡萄球菌测试片。 冷水可溶性凝胶金黄色葡萄球菌确认反应片。 检验程序 检验程序 冷水可溶性凝胶操作步骤 样品制备 按照SN 0172方法进行样品制备。制备的1:10样品匀液后，无菌操作调节样品pH为6.0～8.0，对酸性用 NaOH调节，碱性用HCl调样品匀液的稀释、接种和培养 接种：做10倍递增稀释，选择适宜的2～3个连续稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）接种冷水可溶性凝胶测试片，每个稀释度接种2片，每片1 mL。将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜，用吸管吸取某一稀释度的1mL样液垂直滴加到一张测试片的中央处，然后将上层膜缓慢盖下，避免气泡产生，切勿使上层膜直接落下，再把冷水可溶性凝胶金黄色葡萄球菌的压板放置在上层膜中央处，轻轻地压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，拿起压板，静置至少1min以使培养基凝固。 培养：将测试片的透明面朝上水平置于培养箱内，堆叠片数不超过20片，在36(C ±1(C条件下培养24h±2h。 确认反应：如果上述测试片上没有菌落生长或菌落全部是紫红色（典型的金黄色葡萄球菌特征），无需进行确认；如果测试片上出现黑色、蓝绿色菌落或紫红色菌落不明显，需使用冷水可溶性凝胶 确认反应片作进一步确认。 将上层膜掀起，将确认反应片置入测试片的培养范围内，再将上层膜放下覆盖在确认反应片上，用手指以滑动的方式轻轻将测试片与确认反应片压紧，包括确认反应片的边缘，此步骤可使测试片与冷水可溶性凝胶 确认反应片紧密接触并除去气泡，最后把插入确认反应片的测试片放在36(C±1(C的培养箱内培养1h～3h。 结果计算与报告 判读：紫红色的菌落直接计数为金黄色葡萄球菌；需要使用确认反应片作确认时，计数有粉红色晕圈的菌落。没有粉红色晕圈的菌落不是金黄色葡萄球菌，不应被计数。如果整个培养面积呈粉红色而没有明显的晕圈，说明金黄色葡萄球菌大量存在，结果记录为“多不可计”。 菌落计数培养立即计数可目视或用菌落计数器来计数，放大镜可辅助计数；金黄色葡萄球菌菌落数大于150个时，”表示。 ---------------------------------- ××/T ××××—×××× 2 1 SN/T ×××× -×××× I 1 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN SN/T ××××—×××× 食品中金黄色葡萄球菌的快速计数法－ 冷水可溶性凝胶numeration of Staphylococcus aureus in Foods－ Cold H2O-solube gelling Staph Express film Count Plate Method （征求意见稿） 2013.10