国境口岸耐多药肺结核病例快速诊断方法（征求意见稿）.docVIP

ICS 点击此处添加中国标准文献分类号 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T XXXXX—XXXX 国境口岸耐多药肺结核病例快速诊断方法 Method of rapid dignosis of multidrug-resistant tuberculosis case at frontier port 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：方筠，陆晔，周娴，贾哲甫，张晓航，王健，方筠，查期，章琪，孟成艳，叶魏，韩晓辉,邱瑾 国境口岸耐多药肺结核病例快速诊断方法 范围 本标准规定了国境口岸耐多药肺结核病例的快速诊断流程，标本的采集、处理，以及结核分枝杆菌耐药性的快速检测方法。 本标准适用于国境口岸入出境人员耐多药肺结核病例的快速诊断。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 19489 实验室生物安全通用要求 人间传染的病原微生物名录（卫生部） 缩略语 下列缩略语适用于本标准： PBS 磷酸缓冲液 NALC N-乙酰-L-半胱氨酸 NaOH 氢氧化钠 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 4.1 结核分枝杆菌复合群 Mycobacterium Tuberculosis Complex（MTC） MTC是传染性结核病的病原菌，包括结核分枝杆菌、牛结核分枝杆菌、田鼠分枝杆菌、非洲分枝杆菌。MTC的细菌呈杆状,菌体大小0.6×(1～4)微米，抗酸杆菌，革兰氏染色阳性。生长缓慢，10多个小时繁殖一代，据接种量的多少，10-30天肉眼可见菌落。Lowenstein-Jensen培养基上的菌落粗糙、致密，呈颗粒、结节、或菜花样，乳白或米色，不透明。 4.2 耐多药结核病例 Multidrug-Resistant Tuberculosis（MDR-TB） 对异烟肼和利福平两种一线药物耐药的结核病例。对于耐多药结核病例，世卫组织推荐长达20个月的治疗疗程，治疗药物需包括二线抗结核药物。 4.3 线性探针杂交法line-probe assay(LPA) 将已知与耐药性相关基因的野生型和常见突变型单链序列固定于反应膜上，应用标记有生物素的引物以检测样本的DNA为模板进行扩增，扩增所得产物与上述反应膜杂交，再通过显色反应显示扩增条带结果，与药物敏感的标准菌株扩增条带进行比对，判断结果。 生物安全措施 按照GB 19489和《人间传染的病原微生物名录》的要求，结核分枝杆菌复合群相关材料的生物安全要求如下： MTC相关的的大量活菌操作、动物感染实验和样品检测应在生物安全三级（BSL-3或ABSL-3）实验室内进行； MTC相关的非感染性材料的实验在生物安全二级（BSL-2）实验室内进行； MTC的细菌培养物运输包装分类为A类，UN编号为UN2814； 接触活菌的所有操作必须在IIA级或以上的生物安全柜内进行； 操作人员必须佩带医用N95口罩，穿着一次性防护服，戴一次性医用橡胶手套； 操作人员需要每年进行胸部X光检查、血清HIV检查。 耐多药肺结核病例的监测 根据病史、影像学资料、流行病学调查以及症状、体征，如监测对象不能排除活动性肺结核时，进行痰液样本检查。对痰液样本同时进行分子生物学快速检测和培养检测，确定其是否含有结核分枝杆菌及其耐药性。 痰标本的采集和处理 7.1痰标本的采集 采集疑似病例痰液样本5～10 mL，并检查痰液的质量，过于稀薄或仅是唾液的标本需重新留样。痰标本容器应置于带盖子、可密封的容器内，采样后应1 h内送达实验室。 7.2痰标本液化除菌 挑取约5～10 mL痰液至50mL离心试管中，加等倍痰液体积的NALC-NaOH使用液（含3%NaOH溶液、1.45%枸橼酸钠和0.5% NALC），室温轻轻混匀，使痰液液化、除菌20 min后，立即加入无菌PBS至50 mL,混匀后，4℃水平