烧伤病房耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mec耐药基因及HVR基因分型研究.pdfVIP

MEBO操作，予以多媒体教学，以期留下深刻印象。学生针对这一过程中出现的疑问，提出 问题，教师予以解答¨J。 3．3．留下本次见习课的思考题，通过网络的形式(发送电子邮件)递交思考题的答卷， 教师根据学生所教的答卷，予以分析，答复学生，提供学生进一步阅读的资料(书籍、期 刊、杂志、网络资源等)。为感兴趣的学生提供进一步的指导，并且通过网络，可以及时得 到学生对于课程的意见，有效进行教学内容和方式的修整．保证教学的质量。 参考文献 [1]徐荣祥．烧伤治疗大全[M]．j匕京：中国科学技术出版社，2008：2-9． [23王剑军．医学翟学生培养模式的研究与探索[J]．山西医科大学学报：基础医学教育版。2010，(6)： 654—656． 烧伤创疡杂志，2009，2t(3)：231-233． 烧伤病房耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 meC 耐药基因及HVR基因分型研究 刘平洪1，刘树华1，薛晓东2 1．广州市中西医结合医院烧伤外科，广东 广州 510800 2．甘肃省人民医院烧伤整形科，甘肃 兰州730000 [摘要】 目的：了解我院烧伤病房耐甲氧西林金黄色葡萄球茼(MRSA) 基因型及其与耐药性，为我院烧伤病房MRSA感染的防治及分子流行病学研究提 供实验依据。方法：K—B琼脂扩散法做抗菌药物敏感实验。用聚合酶链反应 (PCR)方法扩增MRSAmec基因以及MRSAmee基因高变区(Hva)，根据扩增片 段大小差异进行基因分型分析基因型与耐药性的关系。结果：我院烧伤病房耐甲氧 A、C两种分型分别为20．3％、78．8％。结论：我科烧伤病房耐甲氧西林金黄色 葡萄球菌HVR分型只有A、C两种分型，以C型多见。 [关键词] 甲氧西林金黄色萄萄球菌；mec耐药基因；HVR基因 金黄色葡萄球菌(SAU)是引起烧伤患者感染的最常见病原菌之一，随着大量广谱抗菌 药物在临床的广泛使用，烧伤患者感染金黄色葡萄球菌的耐药性也不断增强。近年来，烧伤 患者感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分离率一直呈较高水平H。’。预防SAU引 起的医院感染也一直是院内感染控制的重要工作之一。为了解我院烧伤患者感染SAU的耐 一82～ 进行mee基因耐药基因的检测以及HVR基因分型的研究报道如下： 1．材料与方法 1．1．菌株 科，37株来自患者创面分泌物15株来自痰标本，8株来自静脉导管，质控菌株铜绿假单胞 中心提供。 1．2．仪器与试剂 器公司产品)。引物由上海生物工程技术服务有限公司合成，即用型PCR试剂盒2．0(由天 Marker 泽基因工程有限公司提供)；DNA e、DNAMarker均购自上海生物工程技术服务有限 1．3．药敏试验 采用K～B法进行抗菌药物敏感性试验；并根据CLSI／NCCLS2007年标准进行抗菌药 物敏感性判断，质控菌株为：铜绿假单胞菌ATCC25983和大肠杆菌ATCC25922。 1．4．基因组DNA的制备 丛培养MRSA的营养琼脂平板上挑取少许培养菌，接种于3mlLB肉汤培养基中，37℃ 水1．5mL 20cc保存备用。 1．5．耐药基因的扩增 设计引物经Primer引物设计程序验证，由上海生物工程技术服务有限公司合成见表1， 运用即用型PCR试剂盒扩增目的基因t4-“； 1．5．1．扩增mee基因反应体系为：PCRMagicmix2．0 为20umol／L)各luL、模板3uL、双蒸水15uL总体积为35uL。 1．5．2．扩增HVR基因型反应体系为PCRMagicmix2．0 为20umol／L)各luL、模板3uL、双蒸水20uL总体积为40uL。 表1扩增目的基因引物序列表 1．5．3．扩增mee基因基因93。C预变性2min，然后93℃60s，55E60s，72。C60s，循环 35周期，最后72。C延长2min。PCR扩增产物作2％琼脂糖凝胶电泳，出现与阳性对照分子 相当的目的条带判为阳性，并摄像保存。 1．5．4．HVR基因型的扩增94C变性5rain、94℃变性lmin、72℃延伸2min、共30个