单细胞光合生物莱茵衣藻光系统Ⅱ产生超氧阴离子自由基的ESR研究 Spin Trapping-ESR Studies on The Superoxide Anion Radical Generated in Photosystem Ⅱ of Unicellular Green Alga Chlamydomonas reinhardtii.pdfVIP

‘。‘ ‘PapersResearch PI ll,：嚣翳乞…洳 WWW．pibb．aG．cn 单细胞光合生物莱茵衣藻光系统Ⅱ产生 超氧阴离子自由基的ESR研究奉 袁瀚1，力韩璐D杜立波2)田秋2’ 刘 科1’杜林方加‘刘扬 (1’四川大学牛命科学学院，生物资源与生态环境教育部重点实验室，成都610064； 4中国科学院化学研究所，分子动态与稳态结构国家重点实验室，北京100080) 摘要强光辐照下高等植物光系统Ⅱ(PsⅡ)会产生超氧阴离子自由基(O了)，该过程中产生的0_在高等植物光合作用活性氧 自由基代谢中具有重要作用．莱茵衣藻光系统结构与高等植物非常相近．应用新型高特异性自旋捕获．ESR方法及四唑氮蓝 还原法，首次在莱茵衣藻的类囊体膜和PsⅡ中检测到o≠的生成，通过与有关菠菜的ESR实验结果对比发现两者的07产生 分子机制可能极为相似．相比高等植物，单细胞莱茵衣藻具有结构简单、遗传背景清晰与基因组测序工作完备等诸多特点． 因而，针对莱茵衣藻的O了分析可能为深入研究高等植物光合系统中的活性氧代谢机制提供新的契机． 关键词莱芮衣藻，光系统Ⅱ，超氧阴离子自由基，自旋捕获．ESR 学科分类号Q5 早在1951年著名的Mehler反应中就提出高等a．菠菜等高等植物受季节等生长环境影响，不易 植物类囊体膜经光照可产生超氧阴离子自由基 严格控制每批次样品间活性的彼此差异；b．菠菜 虽然是光合作用的模式植物，但其基因组测序工作 (O了)‘n．O歹在高等植物光合作用活性氧(ROS)代谢 中具有重要意义，高等植物细胞中的其他ROS如 尚未完成，且某些光系统突变体诱发比较困难，不 易结合分子生物学手段进行自由基生成机制的深入 过氧化氢(H：09，羟基自由基(·OH)等都是由O； 歧化衍生而来121．然而，由于O了化学性质活泼，在探索．虽然分子生物学模式植物拟南芥的基因组测 生物体内含量很低且极易转化为其他ROS，受物 序工作已完成【-Ol，但拟南芥叶片太小，难于基j传 理检测手段的局限，长时间来对其研究的进展不 统叶片提取PSⅡ颗粒的方法获得足够样品进行活 多．20世纪90年代末期在植物类囊体膜和光系统性氧代谢生理研究． Ⅱ(PSⅡ)中采用新型高特异性自旋捕获．ESR(spin莱茵衣藻(Chlamrdomonas trapping．ESR)方法可确切验证O彳生成．首先，在直径约10灿m的单细胞真核绿藻，其光系统结构 11与高等植物非常相近，也是研究光合 小麦幼苗类囊体膜【，l和PSⅡ颗粒【4】内以5．二乙氧基特别是PS 作用的一种模式生物II-．t2]．相对高等植物，莱茵衣 磷酰基．5．甲．1．吡咯啉．氮氧化物(5-diethoxy 藻结构简单，生长迅速(传代时间为8h)且生长条 phosphoryl-5-methyl一1-pyrrolineN-oxide，DEPMPO) 为自由基捕获剂捕获到o／信号．相比5，5．二甲 件严格可控，遗传背景清晰，基因组测序业已完 基．1一吡咯啉一氮氧化物(5，5-dimethyl—l—pyrroline N．oxide，DMPO)，DEPMPO与O芦的加合物更稳 定，半衰期更长，分子结构的特异性也更强5】．而 ‘国家自然科学基金资助项I!l． ”通讯联系人． 后，作者研究组对光合作用模式植物菠菜PSⅡ颗 粒内o≯的产生机制进行了一系列研究【6叫．综合以 往研究实验，我们发现存在两个难以解决的问题： 收稿日期：2008-03．18，接受日期：2008-05．29 万方数