光谱法对照研究肌红蛋白及其突变体Mb(D60K)与H2O2的相互作用 Comparison between Myoglobin and Its Mutant(D60K) Interacting with Hydrogen Peroxide by Spectrum.pdfVIP

第31卷，第9期 光谱学与光谱分析 l and 1 2 0 1年9月 SpectroscopySpectralAnalysis September，201 职秋艳1一，唐 乾1’2，曹洪玉1’2，安良梅2，张莹莹2，郑学仿1’2。 16622 1．大连大学，辽宁省牛物有机化学莺点实验室，辽宁大连1 2．大连大学生物工程学院，辽宁大连116622 摘要为了解肌红蛋白(Mb)表面60位天冬氨酸(Asp)突变为赖氨酸(Lys)后对蛋白结构稳定性的影响， 本文通过紫外一可见吸收光谱、荧光光谱和停流荧光光谱对照研究了模拟生理条件下野生型肌红蛋白Mb (wT)及其突变体Mb(D60K)与过氧化氢(H20z)的相互作用。结果表明：在Mb(D60K)与H：02发生相互作 用过程中，铁卟啉部位的紫外和荧光发射光谱数据与Mb(WT)相比，性质与功能均表现出显著差异。虽然 只有一个氨基酸的改变，但其结构和性质发生明显变化，说明60位氨基酸在稳定蛋白结构中有重要的作 用。同步荧光光谱和停流光谱的结果同样表明Mb(D60K)的结构与功能受HzQ的影响较小，Mb(WT)受 Hz 02影响明显。综合分析表明，Mb(D60K)在与Hz02相互作用过程中，蛋白结构稳定性提高。 关键词肌红蛋白；Mb(D60K)；过氧化氢；光谱法；蛋白结构 中图分类号：0433．4文献标识码：A DOI：10．3964／j．issn．1000-0593(2011)09—2512—05 面电荷与电荷的作用来调节蛋白结构稳定性及功能的新思 引 言 路Ⅲ。 Mb是由一条肽链组成的含血红素的储氧蛋白。由于 特定位点氨基酸的改变对蛋白结构与功能有着重要的影 Mb血红素辅基的存在，其可以催化Hz02分解为HzO和 响．为了能够更清楚的了解肌红蛋白(Mb)的活性位点和结02。在没有底物存在的条件下与Hz02形成稳定的过氧化氢 构域的功能，基阂工程和化学修饰手段被广泛用于该研究领 功能的影响以及其与Hz02的作用机制一直是科研工作者的 域[1]。王静云等报道马心肌红蛋白突变体Mb(D44K)增强了 研究热点[6]。 Mb的耐热、耐酸变性能力。RaffaellaRonconc92]等将Mb 本文中以野牛型肌红蛋白基因为模板[7]。通过PCR定 (T67R／S02D)与原血红素一L_组氨酸甲酯重建，得到稳定的 点突变方法将肌红蛋白第60位天冬氨酸Asp(D)突变为赖氨 衍生物T67R／s92D-H，经过配体结合实验发现，T67R／ 酸Lys(K)，经热激转化到大肠杆菌BL21中，进行高效表 s92DH比Mb(WT)对叠氮化物和咪唑有更强的亲和力；当 达，得到表达产物经过分离纯化，获得突变体Mb(D60K)用 有酚类底物存在时，具有更强的拟过氧化氢酶活性。Lloyd 于其结构和功能的研究。 等L30将马心Mb血红素结合腔中处于弧铁血红素(heme)远 本实验室在研究中发现Mb(D60K)在与表面活性剂