不同中医治法选择性下调大鼠肝癌高表达基因完整表达序列的筛选.pdfVIP

不同中医治法选择性下调大鼠肝癌高表达基因完整 表达序列的筛选* 1 1 1 2 2 梁超 ，方肇勤 ，管冬元 ，吴中华 ，张辉 1 上海中医药大学基础医学院实验中医学教研室，上海（201203 ） 2 上海中医药大学科技实验中心生化与分子生物学实验室，上海（201203 ） E-mail：ysw141@ 摘 要：目的：为对若干肝癌高表达基因进行进一步研究，克隆各基因的完整表达序列。方 法：DEN 诱发大鼠肝癌后经不同中医治法治疗，肝癌组织后经基因芯片检测，采用电子延 伸结合 PCR 克隆被选择性下调的大鼠肝癌高表达基因完整表达序列。结果：目前已完成 18 个候选 EST 片断的电子延伸，其中 9 个 EST 片断，根据延伸结果设计 PCR 引物，业已经 PCR 验证并测序，结果与电子延伸序列基本一致，其序列已在 GenBank 登录。讨论：本研 究成功地克隆出不同中医治法下调的新基因 cDNA 完整表达序列，为进一步深入研究其生 物学功能打下良好的基础，为深入揭示不同治法防治肝癌的分子靶点做了有益的探讨。 关键词：原发性肝癌，治则治法，基因芯片，电子克隆 中图分类号：R22 0 引言 原发性肝癌（Primary liver Cancer ，PLC ）是我国常见、多发性恶性肿瘤之一。中医药 辨证论治在防治肝癌方面疗效肯定，突出表现在副作用小、提高生存质量和延长生存期等方 面，具有独到的优势。为了进一步揭示和发展中医药治疗肿瘤的机制和方法，揭示和发展证 候和辨证论治的原理和方法。本课题组在中医药防治肝癌的基础研究中，开展了长期大量的 工作，并取得了一定的进展[1-20] 。 在国家自然基金）资助下采用 ZAP-cDNA Gigapack III Gold cloning kit （STRATAGENE）试剂盒构建了大鼠正常肝组织和 DEN 诱发的大鼠肝癌 （含肝组织）cDNA 文库；并与美国科罗拉多大学医学院合作，采用 Affymetrix Rat 230A GeneChip ，观察了正 常 Wistar 大鼠肝脏和 DEN 诱发大鼠肝癌组织后基因组的改变，及其不同中医治法的调整作 用。研究发现，在清热、活血、健脾和 3 者综合治法（全方）选择性地上调那些肝癌表达下 降的基因，以及下调的一些肝癌组织较高表达（芯片读数大于 1000）的基因中，部分基因 是迄今国际上未知的 ESTs 。依据以方测证的原理，这些基因可能与相应的证候相关，并可 能是有关治法所调整的靶基因。并且观察到不同治法对许多基因的调整有一定的选择性，与 以往我们DDPCR 结果一致。下表为课题涉及部分基因及其芯片读数。 表 1 课题涉及部分基因芯片读数 序号 正常 肝癌 西药 全方 清热 活血 健脾 X1 734 1142 1075 1152 731 1090 799 X2 1865 3188 2061 3367 2052 2341 3122 X3 390 1629 1270 743 1522 1106 1177 X4 191 1183 1562 678 1142 779 778 X5 432 1803 2273 1196 2389 1565 1649 X6 434 1096 956 714 982 788 76