姜黄素对缺氧%2f复氧心肌细胞保护作用及HSP70表达影响研究.pdf

摘要 摘要 目的：探讨姜黄素对体外培养的缺氧／复氧心肌细胞的保护和抗凋亡作用， 明确其保护与浓度关系，以及姜黄素抗凋亡的机制与热休克蛋白(HSP70)表达 的关系，探讨药物诱导后HSP70表达的量效与时相的变化，明确药物诱导后保 护的时相及效果。 方法：取出生1～3d的SD大鼠乳鼠的心肌细胞原代培养，至同步搏动良好的 原代培养细胞用于实验；用MTT法检测姜黄素对心肌细胞的毒副作用，计算IC50， 寻找对心肌细胞无明显毒副作用的最佳干预浓度，并取高、中、低浓度用于实 验；细胞计数种板、实验分组和姜黄素干预后，应用连续光谱多功能酶标仪检 测各组、各时间点细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性和丙二醛(MDA)含 量；使用Hoechst33342和碘化丙啶(PI)双染后荧光显微镜照相的方法观测细 胞凋亡与坏死；免疫组织化学方法观察各组心肌细胞中HSP70表达情况。 结果： 姜黄素高、中、低浓度组分别为50I，tmol／L、251tmol／L、12．51xmol／L。 2．各组细胞培养液中的LDH活性的比较对相同时间点各组细胞比较，发 现正常对照组LDH活性最低；LDH活性随姜黄素浓度降低而活性升高；各组 细胞不同时间点比较，发现正常对照组细胞随时间改变，LDH活性改变无统计 学意义(p=O．292)，经过缺氧／复氧损伤的心肌细胞随时间延长，LDH活性增 加，并且各组细胞LDH活性随时间延长呈先递增后递减趋势，于12h达高峰， 24h时有所降低。 3．各组细胞培养液中的MDA含量的比较对相同时间点各组细胞比较，发 现正常对照组MDA含量最低；MDA含量随姜黄素浓度降低而活性升高；各组 细胞不同时间点比较，发现正常对照组细胞随时间改变，MDA含量改变无统计 学意义(p=o．122)，经过缺氧／复氧损伤的心肌细胞随时问延长，MDA含量有 增加不同，并且各组MDA含量随时间延长呈递增趋势，于24h最高。 4．各组细胞的凋亡与坏死比较相同时间点各组细胞比较：缺氧／复氧0h， 细胞凋亡不多，各组中未见明显的凋亡细胞。缺氧／复氧2h、4h、12h、24h各 处理组细胞，与正常对照组相比，可见细胞凋亡增多，但给予姜黄素干预组细 摘要 胞较I／R组细胞凋亡少，并且细胞凋亡与姜黄素浓度成反比。不同时间点比较： 正常对照组细胞随时问改变，细胞凋亡不明显；而经过缺氧／复氧损伤的心肌细 胞随时间延长，凋亡呈递增趋势；给予姜黄素干预组细胞较I／R组细胞凋亡少， 并且细胞凋亡与姜黄素浓度成反比。 5．免疫组织化学检测各组细胞中ttSP70变化相同时间点各组细胞比较： 缺氧／复氧Oh，细胞中HSP70表达较少，几乎不表达。缺氧／复氧2h、4h、12h、 24h各处理组细胞，与正常对照组相比，可见细胞中HSP70增多，但给予姜黄 素干预组细胞较I／R组细胞表达增多，并且细胞中HSP70表达量与姜黄素浓度 成正比。不同时间点比较：正常对照组细胞中HSP70几乎不表达，随时间改变， 无明显变化；而经过缺氧／复氧损伤的一t5肌细胞随时间延长，细胞中HSP70表达 增加。给予姜黄素干预组细胞较I／R组细胞HSP70表达量增多，并且细胞中 HSP70表达量与姜黄素浓度成正比。 结论： 1．姜黄素对体外培养的缺氧／复氧心肌细胞具有保护和抗凋亡作用，其保护 作用与姜黄素浓度呈现一定的剂量依赖关系。 2．随姜黄素浓度增加，缺氧／复氧心肌细胞HSP70表达增加，并且缺氧／复 氧损伤心肌细胞随时间延长，细胞内HSP70表达增加。姜黄素对缺氧／复氧心肌 细胞保护作用可能与HSP70表达增加有关。 关键词：姜黄素：缺氧／复氧；心肌细胞：细胞凋亡；热休克蛋白70 Abstract ABSTRACT on the effectsand ofcurcumin objectiv：Investigateprotective antiapoptotic