致病钩体表层膜蛋白新基因(Lslp)的克隆表达及免疫原性研究.pdfVIP

卷 期 !! ! 微 生 物 学 报 %’ (!! . (! 年 月 ##! $ !#$ %’()(*(+$ ,-$ )*+*,- ##! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 致病钩体表层膜蛋白新基因（ ）的克隆 !#$ 表达及免疫原性研究 ， 3 3 胡昌华 鲍 朗 谢建平 张会东 3 （西南师范大学生命科学学院现代生物医药研究所 重庆 !##03: ） 四川大学华西医学中心 成都 ） （ 13##!3 摘 要：克隆表达钩端螺旋体表层膜蛋白新基因H,’G 并分析表达产物的免疫原性。根据前期研究得到的致病钩体 新基因 （ ）的序列设计引物，在 株致病钩体中扩增 基因并测序。以 酶切 和 H,’G I5?J8?K )7/:$#0 1 H,’G !#L ! H,’G GI;M 32 4，构建重组质粒并用酶切和NOP 鉴定，进一步在大肠杆菌中诱导表达，并进行免疫印迹分析；纯化表达产 物免疫家兔， 检测血清抗体滴度。结果显示 在 株致病钩体中均能扩增出相应片段，且序列同源性达到 ;HQR) H,’G 1 DD S1 T ；构建高效原核表达重组质粒GIR42H,’N，经QN4I 诱导在大肠杆菌中可表达出11KU IR4 融合蛋白，并能与全 钩抗血清发生免疫印迹反应；将上述融合蛋白免疫新西兰大白兔产生 ： 高滴度的 抗体。研究结果提示致 3 :3# Q+I 病钩体膜蛋白新基因H,’G 可在大肠杆菌进行高效表达，表达产物能被全钩抗血清识别，为研究钩体的致病机制和 筛选保护性抗原提供了基础。 关键词：钩端螺旋体，表层膜蛋白基因H,’G，克隆表达，免疫原性 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） P/0D S: ) ###321#D ##! #!2#:##2#! 钩端螺旋体（ ，简称钩体）是系统发育 分子机理以及预防疫苗的设计和基因药物的开发。 H5G-,G=V8 进化上结构和遗传特征都较特殊的一类微生物，它 % 材料和方法 所导致的钩端螺旋体病是在世界范围内流行的人兽 ［］ 共患的自然疫源性疾病3 。钩体的全基因组序列于 % % 材料 ##/ 年由中国科学家完成，对钩体的功能基因组研 % % % 菌株和质粒：问号钩体赖型#30 株、双曲钩 ［］