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荧光标记C12～C20等脂肪酸在反相高效液相
色谱系统中的超微量分析
陈 培 榕 曹林法 蔡剑萍
清（华大学化学系 北京 100084 （中国科学院动物所 北京 10008）
提要 对C12～C20等脂肪酸在反相高效液相色谱(HPLC)系统中的超微量分析进行了研究。月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈
酸、硬脂酸、花生酸等有机酸在所选择的色谱条件下都能得到有效的分离，采用C18键合相的色谱柱，流动相采用甲醇
:水＝97:3流速为1.5mL/min荧光检测波长为 ex＝325nm,em＝397nm。在实验中采用4-嗅甲基-7-甲氧基香豆
素作为C12～C20等脂肪酸的荧光标记物，以丙酮为溶剂，以18-冠醚-6为催化剂，以碳酸钾为碱试剂，通过相转移催化
完成衍生化反应。对方法的准确度、精密度及最小检出限进行了验证 最小检出限达到107g/L数量级。
关键词 高效液相色谱法 脂肪酸 荧光标记 超微量分析
1 前言 momethyl-7-methoxycoumarin，简称Br-Mmc）作为
荧光标记物 为了保持荧光标记物的稳定性，衍生化
生物体 内含有丰富的脂肪酸，有些激素就是脂
反应必须在温和的条件下进行[2 采用丙酮作为反
肪酸或由脂肪酸演化而来 为了更好地了解各类有
应溶剂，选用固体无水碳酸钾粉末作为碱试剂，以
机酸的转化代谢等性能，有必要建立对重要脂肪酸
18-冠醚-6作为相转移催化剂 衍生化反应的步骤
的超微量分析方法，以便更好地对某些脂肪酸进行
为:在自制的微量反应器内5（.5mm 2.5mm的玻
原位水平的研究 过去 曾有人[采用紫外标记物的
璃管），用微量移液管加入2L的0.1g/花生酸
方法对脂肪酸进行高灵敏度的分析，本文所采用的
丙酮溶液，再分别加入5L浓度为lg/L的4-溴甲
荧光标记色谱方法又进一步提高了C12～C20等脂肪
基-7-甲氧基香豆素丙酮溶液和5L的0.2g/L的
酸的检测灵敏度，最低检出限可达到10-7g/L数量
18-冠醚-6丙酮溶液，最后再加入大约lmg的无水
级
碳酸钾粉末 将微量反应器放在酒精灯上封 口，反应
2 实验部分 温度为55 ，反应时间为45min[3～7]反应是通过
18-冠醚-6络合，形成冠醚钾离子的复合产物，从而
2.1 仪器 使碳酸根离子进入丙酮溶液，与花生酸充分反应产
高效液相色谱仪:Varian5000型 美（国）；荧光 生了酸根负离子，使其与Br-Mmc的亲核取代反应
检测器:ShimadzuRF-530（日本）；荧光分光光度 得以进行 花生酸及其它脂肪酸衍生化条件列于表
计:PE-LS50B 美（国） 1中
2.2 试剂
3.2 花生酸荧光标记物的检测波长测定
月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、4-
依照上述的步骤和条件，对浓度为5 10
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