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第八章 色谱分离技术 主要内容 色谱分离技术概述 色谱技术的基本概念 色谱技术的理论基础 色谱法的分类 色谱技术的操作方法 吸附色谱法 分配色谱法 亲和色谱法 第一节 色谱分离技术概要 色谱技术的起源: 1903年Tswett首创 叶绿素的石油醚溶液通过碳酸钙管柱,并继续以石油醚淋洗,由于碳酸钙对叶绿素中各种色素的吸附能力不同,色素被逐渐分离,在管柱中出现了不同颜色的谱带。 命名为色谱法(Chromatography) 气相色谱（1952年） 色谱系统特点是分离效率高，能分离性质极性类似的物质，既能用于少量物质的分析鉴定，也可用于大量物质的分离纯化制备。 一、色谱技术的基本概念 利用物质在溶解度、吸附能力、立体化学特性、分子大小、带电情况、离子交换、亲和力的大小及特异的生物学反应等方面的差异，使其在流动相与固定相之间的分配系数不同，达到彼此分离的目的。 （一）固定相 可以是固体物质（吸附剂，凝胶，离子交换剂），也可以是液体物质（固定在硅胶或纤维素上的溶液） 组成： 空间结构部分：决定固定相尺寸与孔隙率； 化学和生物大分子功能性成分：决定介质与目标溶质特异性相互作用的能力。 P175表8-1 （二）流动相 推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体或超临界流体。 柱色谱中称为洗脱剂，薄层色谱中称为展开剂。 （三）分配系数，分配比和选择因子 1、分配系数：在一定条件下，某种组分在固定相和流动相中含量（浓度）的比值。它是色谱中分离纯化物质的主要依据。langmuir 无论色谱分离的机理如何，当溶质浓度较低时，固定相浓度和流动相浓度成线性的平衡关系。 K 或 k 反映的是某一组分在两相间的分配； ? 是反映两组分间的分离情况。 两组分 K 或 k 相同时，? =1 时，两组分不能分开； 两组分 K 或 k 相差越大时，? 离1越远，分离得越好。 两组分在两相间的分配系数不同，是色谱分离的先决条件。 ? 和 k 是计算色谱柱分离效能的重要参数！ （四）阻滞因素(迁移率) 指在一定条件下，在相同的时间内某一组分在固定相移动的距离与流动相本身移动的距离之比值。小于1 Rf=溶质的移动速度/流动相的移动速度 Rf=溶质的移动距离/溶剂前沿（纸层析） 相对迁移率：指在一定条件下，在相同时间内，某一组分在固定相中移动的距离与某一标准物质在固定相中移动的距离之比值。 （五）检测方法 目标：灵敏度，线性度，重现性，可在线操作 在线检测方法： （P180表8-2） 吸光度、化学发光、电化学、电导率、荧光、红外吸收光谱、折射率、质谱等。 二、 色谱的理论基础 色谱峰的特征值 色谱的定性和定量分析 塔板理论和速率理论 2、峰高（h）和峰面积 色谱峰顶点与基线的距离叫峰高。 色谱峰与峰底基线所围成区域的面积叫峰面积。 峰高和峰面积的大小反映组分浓度的大小。 b. 保留时间tr：试样从进样到出现峰极大值时的时间。它包括组份随流动相通过柱子的时间t0和组份在固定相中滞留的时间。 c. 调整保留时间tr’ ：某组份的保留时间扣除死时间后的保留时间，它是组份在固定相中的滞留时间。即：tr’ = tr- t0 由于保留时间为色谱定性依据。但同一组份的保留时间与流速有关，因此有时需用保留体积来表示保留值。 （三）色谱理论 2、速率理论－影响柱效的因素 （1） 涡流扩散项－A （2）分子扩散项—B （3）传质阻力项— C （4）载气流速与柱效-最佳流速 （5）速率理论的要点 二、色谱法的分类 （一）根据固定相基质的形式 纸色谱：以滤纸作为基质 薄层色谱：将基质在玻璃或塑料等光滑表面铺成一薄层，在薄层上进行色谱过程。 柱色谱：将基质填装在管中形成柱形，在柱中进行色谱分离。 吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶过滤色谱、亲和色谱等。 1、吸附色谱 以吸附剂为固定相，根据待分离物与吸附剂之间吸附力不同而达到分离的目的。 2、分配色谱 在一个有两相同时存在的溶剂系统中，不同物质的分配系数不同而达到分离的目的。相当于连续性的溶剂抽提方法。 3、离子交换色谱 以离子交换剂为固定相，根据物质的带电性质不同而进行分离的技术。固定相为离子交换剂，流动相为电解质溶液。 4、凝胶过滤色谱（分子筛原理） 以具有网状结构的凝胶颗粒作为固定相，根据物质的分子大小进行分离的技术。小分子物质易进入凝胶颗粒内部，流出柱子时间长，大分子不易进入凝胶内部，先流出色谱柱。 三、色谱系统的操作方法 略（P183-P18