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2017-10-10 发布于重庆
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如何提高 DNA 的酶切质量中山大学医学院陈家杰背景：DNA 的酶切主要应用于载体的构建和重组载体的鉴定，还有些线性 DNA 的制备等。我们时常会碰见因载体的双酶切效率低下而连接失败，还有双酶切切不开重组载体但测序正确影响实验进度，等。DNA 的酶切效率的影响因素主要在于质粒载体本身，如市场上大多使用碱裂解法提取质粒 DNA，这一方法容易导致质粒 DNA 上部分酶切位点（Nhe I, Hind III 等）容易隐蔽，或者-20 度保存质粒 DNA 容易形成高级结构，质粒 DNA 在某些宿主（E coli JM109，DH5a 等）中部分位点的甲基化等。方法改进：（1）加热处理，将要进行酶切的质粒 DNA 直接放于 95 度水浴 10 sec 后取出自然放冷，继续进行加样酶切；（2 ）可采用市场上胶回收试剂处理质粒 DNA （如OMEGA 公司的胶回收试剂中 Binding Buffer 能使质粒的高级结构减少），回收质粒 DNA，之后进行酶切；（3 ）对于一些高 GC 含量的酶切位如 Not I 等应当用甲基化缺陷的宿主菌如 E coli Top 10 等。结果：提高 DNA 酶切效率和基因克隆的成功率，节省实验经费。 2010年10月27日实验室创新技术精选（上）第 10 页，共 20 页下一页返回