牛血清白蛋白与Indo-1相互作用荧光光谱法研究.pdfVIP

维普资讯 V01．28 高等 学校 化 学 学报 NO．2 2007年2月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSIT[ES 227～233 牛血清 白蛋白与 Indo-1相互作用的 荧光光谱法研究 白海鑫 ，杨 成 ，杨秀荣 (1．中国科学院长春应用化学研究所电分析化学国家重点实验室，长春 130022； 2．中国科学院研究生院，北京 100049) 摘要 以牛血清白蛋白(Bovine8eIumalbumin，BSA)与荧光探针 Indo一1为蛋白质和配体模型，基于Indo一1的 荧光强度与BSA的分析浓度间的关系，建立了计算二者相互作用位点数的方法，并利用荧光共振能量转移 及各种荧光技术对Indo一1和BSA的相互作用进行了研究．结果表明，Indo一1在BSA中有3个作用位点，这3 个作用位点与BSA中的212位色氨酸(Trp212)间的距离分别为2．93，2．57和2．40啪 ；Indo一1通过疏水性 作用进入到BSA的3个疏水性空腔．在荧光猝灭实验中，通过Microlab500系列进样器和阿 荧光仪的联用 实现了荧光强度的自动和实时记录． 关键词 牛血清白蛋白；荧光探针Indo．1；结合位点数；相互作用；荧光光谱法 中图分类号 0657 文献标识码 A 文章编号 0251-0790(2007)02-0227-07 荧光光谱技术已被用于环境监测、临床化学、DNA序列测定、遗传分析、细胞识别以及细胞内物 质的定位和运动等方面的研究…．监测荧光强度的变化是研究蛋白质与其它物质相互作用时极为有效 的手段之一 ，引．已有诸多关于荧光光谱法研究蛋白质和配体相互作用的报道 圳 ，并提出了一些计 算蛋白质与配体间作用位点数的方法 m 引．血清 白蛋 白是血液中含量最丰富的蛋 白质之一，在配体 的传输与存贮方面起着重要的作用 5，]．关于荧光探针 Indo一1(Scheme1)与其它蛋 白的相互作用的研究已有报 L 道 ，而有关牛血清 白蛋 白(Bovineserumalbumin， BSA)与Indo一1的相互作用的研究仍未见报道．因此，本 工作以BSA与 Indo一1为蛋 白质和配体模型，用荧光光 谱法研究其相互作用，并试图建立一个计算其相互作用 位点数的新方法，这对用荧光光谱法研究蛋白质与配体 CoOK 的相互作用具有重要的意义和借鉴作用． Scheme1 StructureofIndo-1 1 实验部分 1．1 试 剂 BSA与Indo一1均购 自Sigma公司，并于冰箱中贮存．将一定量的BSA溶于 10mL水中制得其贮备 溶液 ，其准确浓度由分光光度法测定，稀释贮备液以获得工作液．Indo．1的溶液于临用前配制，并于试 验间隙避光保存．不同酸度的缓冲溶液由质量分数为 1％的HEPES与盐酸配制而成．实验用水由 MilliporeMilli—Q系统过滤，至其电阻率达 18．2MII后方可使用．其它所用试剂均为分析纯． 1．2 实验仪器 荧光发射光谱、激发光谱和荧光强度均用阿 公司的激光诱导荧光仪测定，该仪器配有样品搅拌 子、光路为 1．0cm且容量为4．0mL的石英样品池以及丹麦产HetoCBN8．30型控温仪．在荧光猝灭实 收稿13期：2006 8I21． 基金项 目：国家 自然科学基金 (批准号资助． 联系人简介：杨秀荣(1946年出生)，女，博士，研究员，主要从事生物分析研究．E-mail：xry—g@ciae．j1．crt 维普资讯 高 等 学校