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bFGF_VEGF复合肽的免疫应答以及抑瘤作用研究.pdf 55页

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暨南大学硕士学位论文 题名(中英文对照) bFGF/VEGF 复合肽的免疫应答以及抑瘤作用研究 Immune response of bFGF/VEGF complex peptide and function in inhibiting the tumor 作者姓名: 潘磊 指导教师姓名 及学位职称: 邓宁 教授 学科、专业名称: 生物化学与分子生物学 论文提交日期: 2014 年5 月 论文答辩日期: 2014 年6 月4 日 答辩委员会主席: 论文评阅人: 学位授予单位和日期: 独 创 性 声 明 本人声名所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其 他人已发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得暨南大学或其他教育机构的学 位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在 论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名: 潘 磊 签字日期:20 14 年 6 月 4 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 暨南大学 有关保留、使用学位论文的规定, 有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和 借阅。本人授权暨南大学 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进 行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名: 导师签名: 签字日期: 年 月 日 签字日期: 年 月 日 学位论文作者毕业后去向: 工作单位: 电话: 通讯地址: 邮编 暨南大学硕士学位论文 摘 要 目的:研究发现bFGF 和VEGF 具有促进血管新生的作用并且在肿瘤血管新 生中具有协同作用,本研究开展VEGF/bFGF 复合多肽(VBP3 )免疫C57BL/6J 小鼠,然后去探讨其免疫应答作用并研究抑瘤作用。 方法:通过镍离子柱亲和层析和离子交换层析方法纯化出诱导表达的VBP3 蛋白,免疫BALB/c 小鼠制备抗bFGF 和抗VEGF 多克隆抗体,酶联免疫吸附试 验(ELISA )检测抗体效价和特异性。通过迁移抑制及成管试验研究抗体对 HUVEC 细胞成管的影响,CCK-8 检测抗体对HUVEC ,SKOV3,LL-2 细胞增殖 抑制的影响。Western blot 检测抗体对SKOV3,LL-2 细胞的bFGF 和VEGF 下 游信号通路中Erk 1/2 和Akt 磷酸化的影响。VBP3 免疫C57BL/6J 小鼠,建立LL-2 的肿瘤模型,从小鼠的肿瘤和脾脏组织中分离出淋巴细胞,利用流式细胞仪检测 相关CD11b,CD11c,Gr-1 的表达情况并在体内研究其抑制LL-2 肺癌的生长作用。 结果:SDS鉴定表明纯化出了纯度达到95%的VBP3 蛋白;ELISA 方 法检测产生了高滴度的抗体,测得小鼠血清效价分别为1:180 000 和1:6000; HUVEC 的迁移抑制和成管实验结果表明VBP3 多克隆抗体在抑制了HUVEC 的 迁移和成管作用,抑制率分别为55%和75% ;CCK-8 检测出抗体体外抑制了 HUVEC ,SKOV3 和LL-2 细胞增殖, 在抗体浓度为 100μg/ml 时抑制率分别达到 17%,39.20%和70% 。W

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