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HSP70-2基因在鼻咽癌细胞增殖与凋亡中的作用.pdf 82页

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暨南大学硕士学位论文 题名(中英对照):HSP70-2 基因在鼻咽癌细胞增殖与凋亡中的作用 The Role of HSP70-2 Gene in the Proliferation and Apoptosis of Nasopharyngeal Carcinoma Cell 作者姓名:孙伟伟 指导教师姓名及学位、职称:邹飞雁 博士 副研究员 学科、专业名称:发育生物学 论文提交日期:2014-6-22 论文答辩日期:2014-6-4 答辩委员会主席:贺智敏 博士 研究员 论文评阅人:何冬梅 博士 研究员 方唯意 博士 研究员 学位授予单位和日期: 独 创 性 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。 除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成 果,也不包含为获得 暨南大学 或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一 同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名: 签字日期: 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 暨南大学 有关保留、使用学位论文的规定,有权保留 并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权 暨南大学 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、 缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名: 导师签名: 签字日期: 年 月 日 签字日期: 年 月 日 学位论文作者毕业后去向: 工作单位: 电话: 通讯地址: 邮编: 暨南大学硕士学位论文 中文摘要 目的: 本研究通过慢病毒技术上调鼻咽癌细胞6-10B 的HSP70-2 基因的表达和异黄酮类药物 ZSGS-4 下调鼻咽癌细胞6-10B 和5-8F 的HSP70-2 基因的表达,探索HSP70-2 基因对鼻咽 癌细胞增殖的影响。 方法: 一方面应用慢病毒技术,构建 pLV-HSP70-2-IRES/eGFP-Neo 目的慢病毒载体和 pLV-CMV-eGFP-Neo 空载慢病毒载体,分别获得目的慢病毒和空载慢病毒转导的6-10B 细 胞稳转株,即6-10B-HSP70-2/eGFP 细胞(目的基因组)和6-10B-blank/eGFP 细胞(空载 对照组),上调6-10B 细胞HSP70-2 基因表达。另一方面应用黄酮类药物ZSGS-4 下调鼻 咽癌细胞6-10B 和5-8F 的HSP70-2 基因表达。继而应用Western blotting 检测hsp70-2 蛋白 表达水平;CCK8 检测细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡状况。 结果: 首先构建了 pEntry221-HSP70-2-IRES/eGFP 入门载体,再应用 LR 反应构建了 pLV-HSP70-2-IRES/eGFP-Neo 目的慢病毒载体和pLV-CMV-eGFP-Neo 空载慢病毒载体,再 运用慢病毒4 质粒包装系统成功包装出目的慢病毒和空载慢病毒,分别转导6-10B 细胞后 经G418 筛选出各自的单克隆细胞,利用Western blotting 方法检测各组细胞hsp70-2 蛋白 表达水平,即6-10B-HSP70-2/eGFP 细胞组与6-10B-blank/eGFP 细胞组或与6-10B 细胞组 比较,hsp70-2 蛋白表达量升高 75.31±3.54% (P<0.01 )或75.13±3.36% (P<0.01 ),验证 了 6-10B-HSP70-2/eGFP 和 6-10B-bla

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