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MurA蛋白的表达及其多抗用于免疫磁珠富集单增李斯特菌的快速检测.pdf 47页

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暨南大学硕士学位论文 题名(中英对照): MurA 蛋白的表达及其多抗用于免疫磁珠富集单增李斯特菌的快速检测 Expression of MurA and development of polyclonal antibody applied to immunomagnetic enrichment for rapidly detect Listeria monocytogenes. 作者姓名:童吉宇 指导教师姓名 及学位、职称: 向军俭 教授 学科、专业名称: 免疫学 论文提交日期: 2014 年 4 月 20 日 论文答辩日期: 2014 年 6 月 4 日 答辩委员会主席: 答辨委员: 论文评阅人: 学位授予单位和日期: - - 独 创 性 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。 据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写 过的研究成果,也不包含为获得 暨南大学 或其他教育机构的学位或证书而 使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说 明并表示谢意。 学位论文作者签名: 签字日期: 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 暨南大学 有关保留、使用学位论文的规定,有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人 授权 暨南大学 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索, 可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名: 导师签名: 签字日期: 年 月 日 签字日期: 年 月 日 学位论文作者毕业后去向: 工作单位: 电话: 通讯地址: 邮编: 暨南大学硕士学位论文 MurA 蛋白的表达及其多抗用于免疫磁珠富集单增李斯特菌的快速检测 MurA 蛋白的表达及其多抗用于免疫磁珠富集单增李斯特菌的快速检测 摘 要 目的:单增李斯特菌表面蛋白MurA 可作为检查的标志分子,原核表达MurA , 制备鼠多克隆抗体,将抗体与磁珠偶联制成单增李斯特菌免疫磁珠,将免疫磁珠 富集技术结合选择性平板培养法,建立免疫磁珠-选择性平板快速检测技术,以 缩短增菌耗时和提高特异性。 方法:设计 MurA 蛋白的基因引物,PCR 扩增后,将MurA 基因插入原核表 达载体 pET28a(+) 中,转化大肠杆菌进行优化表达;表达产物经镍柱纯化,质谱 分析后免疫小鼠,制备抗 MurA 的多克隆抗体;通过间接ELISA 方法,分析多 抗效价及交叉性;用多抗制备 MurA 特异性免疫磁珠,建立单增李斯特菌免疫磁 珠-选择性培养基检测方法,并对人造污染牛奶样品进行检测。 结果:上清中见 72kD 的可溶性诱导蛋白表达,经质谱鉴定其为 MurA 蛋白; 3 次免疫小鼠后,MurA 抗血清效价达 1:10 000,与伤寒沙门氏菌、副溶血弧菌、 大肠杆菌及属内其它病原菌均无交叉反应,显示了良好的特异性;用该抗血清制 3 备的免疫磁珠结合选择性培养基检测法。单增李斯特菌浓度≥10 CFU/mL 均能 检出,与英诺克李斯特菌存在轻微交叉反应;仅需 9 h 增菌可检出牛奶样品,较 传统方法可将增菌时间缩短 39 h,减少 3/4 以上的耗时;检测限为0.4 CFU/mL。 结论:成功表达并经

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