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大蒜果聚糖代谢酶及黑蒜中糖与5-HMF的研究.pdf 86页

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暨南大学硕士学位论文 大蒜果聚糖代谢酶及黑蒜中糖与 5-HMF 的研究 Research of Garlic Fructan Metabolic Enzymes and Sugar and 5-HMF in Black Garlic 作者姓名:卜利伟 指导教师姓名及学位、职称:黄雪松 博士 教授 学科、专业名称:食品科学 论文提交日期:2014.05.25 论文答辩日期:2014.06. 03 本论文由国家自然科学基金(No. 31171722 )资助 答辩委员会主席: 吴晖 论文评阅人:刘国琴教授 胡长鹰教授 学位授予单位和日期:暨南大学 2014 年 6 月 独 创 性 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。 据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写 过的研究成果,也不包含为获得 暨南大学 或其他教育机构的学位或证书而 使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说 明并表示谢意。 学位论文作者签名: 签字日期: 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 暨南大学 有关保留、使用学位论文的规定,有权保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权 暨南大学 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影 印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名: 导师签名: 签字日期: 年 月 日 签字日期: 年 月 日 学位论文作者毕业后去向: 工作单位: 电话: 通讯地址: 邮编: 暨南大学硕士学位论文 摘 要 大蒜果聚糖是大蒜中的重要活性成分之一。在大蒜生长、贮存过程中,大蒜果聚糖代 谢酶对大蒜果聚糖的分子特征有着重要的影响。为明确大蒜中果聚糖的变化规律,本论文 采用硫酸铵盐析法粗分大蒜果聚糖合成酶(FBE )及大蒜果聚糖水解酶(FEH ),用ConA Sepharose亲和层析、DEAE Sepharose FF阴离子交换层析和Superdex 200凝胶过滤层析等方 法对其予以细分,进而采用denovo测序法测定目的条带的氨基酸序列,然后与其它植物中 的1-FEH 以及大蒜克隆的FEH进行序列比对。此外,用高效液相色谱-蒸发光散射检测器 (HPLC-ELSD )测定黑蒜加工过程中的果糖和蔗糖;用苯酚硫酸法测定其总果聚糖;用反 相高效液相色谱法(RP-HPLC )测定其5-羟甲基糠醛(5-HMF )的变化规律。取得了如下 结果: (1)部分纯化了 1-FEH ,对 Pro-gel 分析所得条带进行测序得到该酶的两个肽段的氨 基酸序列,分别是 PADHYPAYMNDTNR 和 ILKSGKHGPKCGEGER ,但经 BLAST 序列 比对发现此条带不同于已经发现的其他植物 1-FEH ,可能是一新型的果聚糖水解酶。 (2 )证实 1-SST 活性主要存在于 30%-40%硫酸铵沉淀部分的粗酶液中。 (3 )建立HPLC-ELSD 分离六种糖的分离方法,其分离方法为:Prevail carbohydrate ES 糖柱梯度洗脱,梯度条件为:0 min,75%乙腈水;15 min,65%乙腈水;30 min,50%乙腈 水;40 min ,25% 乙腈水,柱温箱温度40 ℃,流速1 mL/min,ELSD 撞击器关,漂移管温度 90℃,载气流量2.5

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