抗人TLR4单克隆抗体(mhTLR4抗体)的制备及其生物活性研究论文.pdfVIP

及其生物活性研究 汪茂荣扣 朱进2‘张怡青1张馨1熊熙1 【摘要】目的：运用单克隆抗体技术制备抗人TLR4单克隆抗体，并鉴定其生物学活性。 rhTLR4和佐剂混合至总体积 方法：以rhTLR4作为抗原，按照lO“g／只／次进行免疫。将lO“g 为0．5ml，经超声充分乳化后，腹腔注射免疫小鼠，共3次。取血测定小鼠mhTLR4抗体效价及 其阻断LPS诱导的人PBMC表达TNF—a的影响。分离小鼠脾脏B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合并培 养，挑选阳性杂交瘤细胞，扩大培养，收集细胞上清，采用HiTrapproteinG亲和柱纯化单抗 并进行超滤浓缩，鉴定单抗阻断内毒素效应的生物学效应。结果经3次免疫后的小鼠血清中抗 时，抑制作用才消失。分离小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，采用常规的间接ELISA法检测 10块培养板中的阳性克隆，获得3株阳性单克隆杂交瘤细胞。其中2株细胞经过扩大增殖培养， 并经纯化浓缩制备出较高产量的鼠抗人TLR4单克隆抗体。生物学活性测定表明，2株杂交瘤细 论：本文在国内首次应用重组人TLR4蛋白为抗原，成功制备出鼠抗人TLR4单克隆抗体，经鉴 定具有较高的阻断内毒素信号传导的效应。为进一步研制人源化抗TLR4抗体、研制新一代抗内 毒素靶向药物，治疗肝病的内毒素血症、控制重型肝炎的病情进展、抗革兰氏阴性菌感染性休 克奠定了基础。 【关键词】人TLR4；单克隆抗体；制备；LPS；PBMC；TNF—a ofanti-humanTLR4monoclonal its Preparation antibody(mhTLR4antibody)andbiological activitystudy WANG Xil Mao-rong”，ZHUJin2’，ZHANGYi—qin91，ZHANGXinl，XIONG of 2． 1．LiverDiseaseCenterof 81t tal 210002,China； PtA．theHospi PLA?Nanjing 资助项目：全军十一五科研攻关项目(08G023)，南京军区}．一五熏火专项课题(082012) 作者学位：l解放军第八一医院全军肝病中心，210002南京市；2南京军区军事医学研究所医药生物技术室， 210002南京市 通讯作者：+汪茂荣({硕。七主任医师，南京军区‘122工程’全军级学科带头人)，Email：mao]on必3r_!g照g!堕i．!：塑!! 朱进(博：}=，研究员，主要从事生物医药的研发)，gmail：；．jsi里曼鲤§魁曲QQ：￡Q翼：鲫 276 of MedicalInstituteBiotechniques,Nanjing Huadong author) monoclonal To anti—’mhTLR4 antibody [AbstractlObjectiveprepare antibodybyusing We human and its Methodsusedrecombinant technologyidentifybiologicalactivity． asan toimmunizemouseinaccordancewiththe of TLR4(