苦参碱联合CTL对人胃癌细胞杀伤作用的研究论文.pdfVIP

、苦参碱联合CTL对人胃癌细胞杀伤作用的研究 一 温州医学院附属第二医院普外科(温州325027) 蒋平 王中林郑志强 flavescentAit) 3及IL-2，持续刺激4天，诱导T淋巴细胞的增殖和 苦参碱是从中药苦参(sophora 的干燥根中提取的一类活性物质，它具有多种药理 分化。 作用，在防治肝炎、抗肝纤维化、抗炎、抗心律失常、 1．2．2用流式细胞仪进行淋巴细胞亚群的检测 抗病毒、抗肿瘤等方面有重要应用价值。研究结果 取部分刺激7天的T淋巴细胞用流式细胞仪进行 表明，它的毒副作用小，能提高机体免疫力。CTL 是过继免疫治疗肿瘤的一个发展方向，本研究利用 为5×105，将细胞分为3管，第一管阴性对照加入 Mouse PHA、OKT3、IL-2诱导活化CTL，探讨苦参碱对人IgGlPE和MouseIgGl FITC各3IA，第二 外周血T淋巴细胞增殖的影响、联合CTL抗肿瘤 作用以及对细胞因子IL-2和IFN一7水平的影响，进 一步对其免疫调节机理进行探讨。 管加入1％多聚甲醛200p1固定，流式细胞仪检测。 1材料与方法 1．2．3苦参碱对人外周血T淋巴细胞增殖活性的 1．1材料 影响细胞培养：将上述细胞悬液(细胞密度调至 人胃癌细胞株NCI-N87购于中国生命科学院 上海细胞库；人外周血由健康志愿者提供；苦参碱 孔细胞培养板中，各组均设6个复孔。试验设空白 (西安天园生物制剂厂，纯度99．8％)，将其充分溶对照组和苦参碱组，后者加入苦参碱溶液，使其终浓 1640培养液和 解于RPMI1640培养液中；RPMI 度分别为0．1、0．5、1．0、2．0、3．0、6．0mg／ml，空白 0．25％胰酶均为Gibco公司产品；青霉素、链霉素和对照组为加入等体积RPMI1640培养液。96孔培 丙酮酸钠购于Invitrogen，HEPES是上海普飞公司养板置37℃、5％C02孵箱中培养48h和72h。 产品；Ficoll分离液为上海华精生物高科技有限公CCK一8法检测：于各个时间点每孔培养液中分别加 司产品；细胞增殖／毒性检测试剂(CCK-8)为株式会 社同仁化学研究所产品；IL-2购于北京四环制药养3h后，在酶标仪上波长450nm处读取吸光度A 厂；PHA-L是Roche公司产品；OKT-3为武汉生物 survival 值(实验重复3次)，计算细胞存活率(cell IFN一7 制品研究所产品；Human Immunoassay和rate，CSR)。 HumanIL-2 Immunoassay购于RDSystems公 公式：细胞存活率(CSR)一试验组A值／对照 FITC PE、 100％ 司；MouseIgGl Conjugate、MouseIgGl 组A值X CD4 AntiHumanCD3FITC、AntiHumanPE、An— ti CD8 HumanPE为BD公司产品。垂直净化工作 2．382 胎牛血清的RPMI1640培养基(含HEPES 800型酶标仪 台，二氧化碳培养箱(Ce