雷公藤内酯醇的人肝和大鼠肝微粒体中细胞色素P450代谢的研究.pdfVIP

◎ 药用植物化学与中药有效成分分析研讨会论文集(上) 雷公藤内酯醇的人肝和大鼠肝微粒体中细胞 色素P450代谢的研究 李巍，刘勇，何芋岐，张江伟，杨凌事 (中国科学院大连化学物理研究所药用资源开发组，大连116023) 摘要：尽管雷公藤内酯醇有多种药理活性并被广泛应用，但是它在人体内的代谢谱及代谢路径谱仍未得 到确认。本研究的目的在于体外鉴定雷公藤内酯醇在人和大鼠肝微粒体中的代谢产物和代谢路径．在 NADPH存在的条件下，当雷公藤内酯醇与人肝微粒体、大鼠肝微粒体和苯巴比妥诱导后的大鼠肝微粒 M一4)，苯巴比妥的诱导显著提高产物的生成速率。HPLC．MS的结果表明，所用的代谢产物均为单羟化 的雷公藤内酯醇。重组单酶，特异性化学抑制剂和相关性分析实验表明，CYP3A4是参与其代谢的主要 P450酶。 引言 et 它有广泛的药理活性，包括抗炎症、抗生育、抗肿瘤及免疫抑制活性(Cartera1．2006；Chen2001；Fidler et eta1．2003)．此外，TPL与其它细胞毒性药物联用，可以提高这些药物的抗肿瘤活性 a1．2002；Yang et et a1．2002；Matsuia1．2008)。尽管有相应的药代动力学研究表明，TPL可能在体内快速的代谢 (Fidler ct (Shaoa1．2007)，然而其代谢产物及代谢酶谱仍未得到确认。 应可能影响到药物的生物利用度和药物的清除，当有药物共服时，生物利用度和清除率可能由于共服药 物的抑制和，或诱导作用发生改变(Guengerich2006)．对雷公藤内酯醇代谢的路径的鉴定对于其安全应 用尤为重要。然而，现在仍没有关于其在CYPs催化下的代谢的报道。 本研究利用人、大鼠、苯巴比妥诱导的大鼠的肝微粒体，结合重组单酶、特异性化学抑制剂、相关 性分析及分子对接等方法，对雷公藤内酯醇的代谢路径及可能的代谢产物进行了分析。研究表明，雷公 藤内酯醇在人肝微粒体(m。M)的代谢下，可以生成3个代谢产物，在大鼠肝微粒体(RLM)的催化 材料与方法： 1．试剂 雷公藤内酯醇购自中国药品生物制品检定所。 2．肝微粒体和重组单酶 ’通讯作者：杨凌，研究员，博士生导师．中国科学院“百人计划’入选者，大连化学物理研究所药用资源开发研究组组长． 主要研究方向：早期ADME性质及其导向下的新药发现研究；天然产物及医药工业生物技术研究．E-mail： 药用植物化学与中药有效成分分析研讨会论文集(上) 人肝样本为大连医科大学的尸检标本(n--9，年龄为27-48岁)。捐赠者的用药史未知．肝脏在制备微 粒体前贮存于液氮中．SD大鼠(n=20)，10只处死取肝脏：10只注射苯巴比妥3天(80mg，kg，i．p．)后， 处死取肝脏，保存于液氮。 et 肝微粒体的制备采用超速离心法(Liu andSato et 1964)． 测定(Lowrya1．1951)。细胞色素P450的含量采用Omura和Sato法测定(Omura Biolabs· CYP2C19和CYP3A4购自New England 3．肝微粒体代谢研究 mM 反应体系为200lal，包括O．5mg HLM或RLM(苯巴比妥未诱导和诱导后)，100p8 protein／ml mill后，向体系中加入100m乙腈终止 7．4磷酸缓冲液，NADPH产生体系和TPLl00灿