零排放养猪中原位降解菌的筛选和菌种组合效果研究论文.pdfVIP

零排放养猪中原位降解茵的筛选和菌种组合效果研究 曾典军1、邓鹏1、丰来1、郭帅1周法永2 (1湖南泰谷生物科技有限责任公司；2中国农业科学院农业资源和农业区划研究所) 摘要：筛选到的单一菌种中，在适宜的培养条件下，蛋白酶活最高的是枯草芽孢 杆菌：222．3 U／g；纤维素酶活最高的是哈茨木霉：559．9U／g：脂肪酶活最高的是 巨大芽孢杆菌：23．4 U／g：淀粉酶活最高的是枯草芽孢杆菌：52．5U／g。对新鲜猪 粪降解最快的是：枯草芽孢杆菌，其次是巨大芽孢杆菌、哈茨木霉。复合菌剂中， 蛋白酶活最高的是菌种组合10：285U／g；纤维素酶活最高的是菌种组合10：635 U／g；脂肪酶活最高的是菌种组合lO：48．2U／g；淀粉酶活最高的是菌种组合9： 52．9U／g。对新鲜猪粪降解最快的是组合lO、组合6、组合7。从实际应用的情况 看，菌种组合10：无论是对猪排泄物的降解能力还是对猪的生长促进作用都是 最好的；其次是菌种组合6。由于组合lO的菌种种类多，生产工艺较复杂，生 产成本高，所以选定菌种组合6：枯草芽孢杆菌+米曲霉+酿酒酵母作为商品微生 物制剂——生物核心料的菌种组合。 关键字：零排放，原位降解菌、生物垫料，微生物制剂，菌种组合，新鲜猪粪， 蛋白酶，纤维素酶，脂肪酶，淀粉酶，生物核心料，除臭，降解，到期垫料。 前言 零排放养猪技术也称之为畜禽粪便原位降解健康养殖技术或生物床养殖技 术，其基本原理是在经过特殊设计的猪舍里，填入生物垫料，再将仔猪放入猪舍。 猪从小到大都生活在这种生物垫料上面，猪的排泄物被生物垫料中的微生物迅速 降解、转化，日常管理中，不再需要对猪的排泄物进行人工清理，达到污染物零 排放的目的。该技术最早始于日本，随后传入欧美等国。 我公司于2006年开始引进和研究零排放养猪技术，然而，由于国情及地区 差异，日本的相关技术并不完全符合我国的实际情况。我们在引进“发酵床”和“自 然养猪法”的基础上针对我国南方地区，特别是湖南地区的自然特点，对发酵床 和自然养猪法的菌种筛选复配，微生物制剂的生产工艺流程，微生物添加剂，生 物垫料原料的选择配制，生物垫料的制作和使用方法，猪舍的建设，养猪的管理， 到期垫料的处理和综合利用等进行了系统的研究，开发出了适合本地特点的：多 功能生物活性垫料养殖零排放及其配套技术，经鉴定该技术处于国内同类技术的 先进水平。本文仅对零排放养猪中原位降解菌的筛选和优化组合的研究结果进行 报道。 l、材料和方法 237 1．1菌种筛选 按常规方法从养猪场的猪排泄物堆积场地、生活垃圾堆、造纸厂排污口污泥、 腐烂的秸秆、有绿色微生物的树皮等取样，分离和筛选产纤维素酶、蛋白酶、脂 肪酶和淀粉酶的高效菌株。 1．2酶活测定 按农用微生物菌剂规定的方法(GB20287．2006)测定纤维素酶和蛋白酶活 性。 脂肪酶活测定【34】：脂肪酶作用于橄榄油乳化液，催化酯键水解，生成脂肪 酸，用酚酞为指示剂，用标准Na0H溶液滴定脂肪酸，根据Na0H的用量来计算脂 肪酶活力。 淀粉酶活测定【5】：l 5．6条件下，每分钟酶解1％可溶 ml酶液在40℃、pH 性淀粉溶液产生1mg麦芽糖的酶量定义为一个酶活力单位(U／m1)。 1．3单一菌种对新鲜猪粪降解试验 菌种：以上筛选到的菌种。 新鲜的猪粪：90 Kg左右育肥杜×(长×大)三元杂交猪当天排出的粪便。 选新鲜的猪粪，每处理5公斤，按39／00的比例将筛选到的各菌种分别接种到新 鲜的猪粪中，拌均匀，每隔两天观测臭味情况。 1．4菌种组合筛选和优化 菌种：以上筛选到的菌种。 培养组合菌的培养基：麸皮50％，米糠25％，统糠13％，豆粉8％，红糖4％。 将同一组合的单一菌，按真菌培养12小时，再接种细菌培养8小时，再接种 酵母培养8小时的顺序，依次接种到培养基上，接种量按真菌2％、细菌1％、 酵母2％，培养基的湿度在70％左右，起始温度在25℃左右。 将筛选出的菌株根据能同往、互惠共生、协同作用原则进行组配，每一组合 分别进行混合培养，形成复合菌剂。测定复合菌剂的各项性能指标。 1．5不同菌种组合对新鲜猪粪的降解 菌种组合：按以上方法做成的复合菌剂。其它