流式技术分析细胞表型和致敏机制的研究论文.pdfVIP

UNDEMAN MS．Evaluationofanovel E，STELLANF，MCLACHLAN tool 【15】 hi曲throughputscreening forrelativeemissionsofindustrialchemicalsusedinchemical products网．Chemosphere，2011，82(7)： 996．1001． 【16】 唐纳德。麦凯．环境多介质模型：逸度方法【M】．黄国兰陈春江孔庆宁，译．北京：化学工业出版 社，2007． (17】 薛定宇，陈阳泉．高等应用数学问题的MATI。AB求解IM]．北京：清华大学出版社，2004． 流式技术分析细胞表型和致敏机制的研究 刘瑛王智琴矫健王聪刘宁严婉静 10021) (中化集团沈阳化工研究院测评中心，沈阳市1 摘要：目的分析5种致敏药物对小鼠耳后淋巴结7种免疫细胞表面分子表达和6个细 胞亚型百分比的变化，探讨其用于评价致敏性的机制性研究依据。方法选用24只健康小 鼠，每组4只，在本实验室驯化1周后分别使用致敏药物耳后涂抹刺激后，提取耳后淋巴 结细胞，使用流式细胞仪检测CD45+CD3+％，CD3+CD4+％,CD4+CDl 54+％，CD4+CD28+％, 致敏后7种表面分子表达与空白对照组相应表型表达出现明显差异；戊二醛、DNCB、巯基 苯并噻唑致敏后出现部分表达的差异性变化。结论可以初步判断CD4和CD28的表达可能 参与了致敏效应，可能成为初筛药物致敏效应的细胞表型。 关键词：流式细胞术；免疫细胞：细胞表型；致敏机制 随着化学品品种的增加，非天然药品、中药、新合成方法制备的药品不断增加，药物 变态反应的发生率也普遍升高【1】，过敏反应在其中最为普遍，可见其安全性检测还存在不足 口J。自2010年OECD推荐局部淋巴结试验作为标准化学物皮肤致敏性安全评价试验以来， 越来越多的学者提出流式检测和鉴别致敏效应的观点。本研究通过流式细胞技术研究致敏 小鼠耳后淋巴结中不同免疫细胞亚群的变化，将对致敏发生机制，以及通过寻找不同细胞 表型的变化和致敏之间的关系，找到致敏标志性的细胞表型提供数据支持，对评价化合物 潜在致敏性具有重要预测作用。 l材料与方法 1．1动物 健康小鼠，6．8周龄，适应一周后开始试验。自由饮食，饮水，试验环境执行GBl4925．2001 标准。 1．2主要试剂和仪器 丁子香酚、2己基肉桂醛、戊二醛、DNCB、巯基苯并噻唑作为致敏药物：细胞抗体购 自美国BD公司；测试仪器为美国BD公司FACS-CantoII流式细胞仪。 1．3试验方法 1．3．1免疫动物小鼠随即分为对照，各致敏药物组，每组4只。使用耳后涂抹的双侧给药方 式；对照组使用生理盐水双侧涂抹的相同操作，从而保持试验的可比性。 1．3．2淋巴结细胞悬蒋制备小鼠脱颈处死，腹面向上，暴露颈部，夹住甲状腺旁血管，牵拉 出耳后淋巴结。放置200目细胞滤网上，使用注射器芯研磨，细胞过滤至滤网下的清洁容 器中。将研磨，过滤后的细胞悬液移至离心管中，使用PBS将细胞调节至1×106／ml浓度备 用。 悬细胞，当日上流式细胞仪分析。 FACSCanto 1．3．4数据处理全部数据经BD II和FACSD．va软件获取和分析。 2结果 2．1T淋巴细胞变化 81 通过CD3+CD45+来定义T淋巴细胞(见图1)，结果显示丁子香酚、2．己基肉桂醛、 戊二醛致敏组CD3+CD45+％明显高于对照组；DNMC和巯基苯并噻唑没有明显变化。但T 淋巴细胞中CD4+表达在所有致敏组均出现明显升高，结果见表1。 2．2B淋巴细胞变化 分比数量在丁子香酚、