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第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 P．B104 绿原酸致敏性的研究+ 罗飞徐小平”包旭周莎 四川大学华西药学院，成都，610041 xul06@sina．corn 绿原酸是由咖啡酸与奎尼酸组成的缩酚酸，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一 种苯丙酸类化合物…。具有抗病掣21、抗氧化【3】、抗炎【4l、抗肿瘤f5】【6】等作用。 关于绿原酸的致敏性问题早在上世纪60年代就受到人们关注，并有大量文献讨论。主要分为以 Freedman SO等人最 SO等人认为有致敏性和LaytonLL等人认为的无致敏性两派结果。尽管Freedman 终承认其研究尚存在一些瑕疵，绿原酸致敏性问题的总体结论是没有致敏性，然而，近年针对中药 注射剂不时出现的致敏性问题再次将目光集中到了绿原酸致敏性问题上。为进一步证明绿原酸是否 存在致敏性，本文结合绿原酸致敏性文献提出的几种可能的致敏原，包括绿原酸、共存杂质和大分 子物质等，采用文献提供的相关方法，设计了高纯度绿原酸及其注射剂与不同纯度绿原酸提取物为 对象，采用主动和被动致敏试验，采用HPLC法和LC．MS法等，研究阐明绿原酸的致敏性问题。 关键词：绿原酸致敏性透析法大分子 1 实验部分 1．1材料与动物 ． (1)试验用药 取物(含绿原酸约92％)、金银花提取物(含绿原酸约22％)、高纯度绿原酸原料药(含绿原酸99．87％) 皆由四川九章生物化工科技发展有限公司提供(提取工艺略，主要为醇溶液提取后，经树脂等法精 制获得的不同纯度的绿原酸提取物。)。 进口分装)，上海化学试剂采购站销：生理盐水(批号为A041128．02)，四川科伦药业股份有限公司 生产。透析膜(MWC01000道尔顿)Visking德国。 (3)动物 雌雄各半，体重180--2109，均由四川大学实验动物中心提供。 1．2溶液的制备 ． (1)供试溶液的制备取各试验用药适量，加生理盐水溶解成含供试品2．25％的溶液，作为高浓度供 试溶液；取该溶液适量，加生理盐水稀释成0．45％的溶液作为低浓度供试溶液。 (2)透析内液的制备取含试验用药2．25％的供试溶液2ml，加入透析袋，将袋悬浮于生理盐水中进 行透析，直至袋内溶液中无绿原酸检出为止，即得含未扩散部分的透析内液，经用0．22pan的超滤膜 过滤除菌后，作为用于过敏试验的未扩散部分待测溶液。 (3)透析外液的制备取试验片j药的饱和溶液2ml，加入透析袋，将袋悬浮于生理盐水进行透析，直 到外液中绿原酸含量相当于2．25％供试品溶液中绿原酸含量为止，即得含扩散部分的透析外液，经 用O．22Hm的超滤膜过滤除菌后，作为用于过敏试验的扩散部分待测溶液。 1．3豚鼠全身主动过敏反应试验 I剂量设计根据临床人拟用绿原酸最大剂量lmg／kg体重，折算成豚鼠剂量约为7．5mg／kg体重【ll】， 以每只豚鼠3009体重和给药体积0．5ml计算，确定供试药液浓度为2．25％。 II试验方法将豚鼠随机分为12组，每组5只(如表1)，间日一次腹腔注射各组相应的致敏供试药 液O．5ml／只，连续四次，然后分别于末次腹腔注射后的10天足趾静脉注射各组相应的激发供试药液 1．0ml／只激发注射。各组在激发注射后30min内观察是否出现过敏反应。 III试验结果见表1。 。’基金项目：四川省技术创新重点项目(批准文号：成财建【2007】53号) ”通讯作者：徐小平，男，副教授，硕士生导师。E-mail：xuxp319@seu．edu．cn。 第一作者：在读研究生，药物分析专业。 第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 1．4大鼠被动过敏试验 (1)试验方法 I试验设计 和1．O％。 II检测注射后24小时，各组各鼠分别尾静脉注射与致敏相同的激发抗原O．5ml及等量1％依文思 大小。若直径大于5mm者，判定为大鼠被动皮肤