日本血吸虫核酸疫苗体内电穿孔法的进一步研究论文.pdfVIP

生物制品研发与质量控制及生物反应器研讨会 日本血吸虫核酸疫苗体内电穿孑L法的进 一步研究 戴洋，朱荫昌，王晓婷，唐建霞，赵松 (江苏省血吸虫病防治研究所) 江苏省无锡市梅园杨巷117号，214064，联系电话：0510 [摘要]目的进一步探索体内电穿孔技术增强血吸虫核酸疫苗免疫保护作用的稳定性、可靠 性及可重复性。方法人量制备日本血吸虫鸡尾酒式DNA疫苗和蛋白疫苗。96只5—6周龄的BALB／c 雌性小鼠随机分成A、B、C、D、E、F、G、H8组，每组12只，其中A组(空质粒对照组)每只小 u1 鼠分别‘『．第0、3、6周麻醉下经股四头肌注射100pcDNA3．1质粒DNA：B组(电穿孔空质粒+鸡 ul 尾酒式蛋白疫苗组)每只小鼠分别丁．第0、3、6周麻醉．卜．经股四头肌注射100pcDNA3．1质粒DNA， 每次DNA疫苗免疫后即辅以体内电穿孔，于第9周每只小鼠经背部皮’卜．多点注射100u1鸡尾酒式蛋 u 白疫苗+100 醉‘卜．经股四头肌注射100ul鸡尾酒式DNA疫苗：D组(鸡尾酒式DNA与蛋白疫苗联合免疫组)鸡尾 酒式DNA疫苗免疫方法同C组，丁第9周每只小鼠经背部皮卜．多点注射100ul鸡尾酒式蛋白疫苗+100 ul 组(电穿孔鸡尾酒式DNA与蛋白疫苗联合免疫组)鸡尾酒式DNA疫苗免疫及体内电穿孔方法同B组， 1 但丁第9周每只小鼠经背部皮’卜．多点注射100u1鸡尾洒式蛋向疫苗+100uFCA：G组(TPI组)每 ul 只小鼠分别丁．第0、3、6周麻醉。卜．经股四头肌注射100 周，蛋白疫苗加强免疫后2周，所有小鼠同时经腹部皮肤感染40±1条尾蚴。攻击感染后42d剖杀 小鼠，计数各小鼠成虫数和肝脏虫卵数。首次免疫前2d及感染前2d分别经尾静脉采血，分离血 清检测I蜘抗体水平、抗体弧类IgGl及IgG2a，并取小鼠脾脏制备单个脾细胞怂液，脾细胞经ConA 纽)检获的成虫数均显著降低(尸均0．01)，D组的减虫率显著高丁．C组和B组(尸值分别为O．0l 的减卵率可达67．49％，显著高丁．D组雨IE组(尸值均0．05)：各实验组均可检测剑特异性的IgG抗 体。经SEA特异性刺激后，各实验组的1L一2和IFN—y水平较对照组明显升高，而IL一4则朱检测剑。 结论DNA疫苗通过体内电穿孔再结合蛋向疫苗的联合府JlJ可较人程度的提高疫苗的免疫保护作川， 表明该免疫方法具有较女r的可歪复性利稳定性，是一种较理想而且可行的血．吸虫病免疫策略。 [关键词]日本血吸虫；联合免疫；疫苗；体内电穿孔；稳定性 Toevaluatethe and on [Abstract]0bjectivestability，reliabilityrepeatability of intheDNAVaccines icationelectroporation，刀y，yD appl DNA l vaccinesand infectioninBALB／cmice．MethodsThe cocktai cocktailvaccines protein forim硼unizationwere femaleBALB／cmiceof5—6weeksoldwere prepared．Ninety—six randomly dividedinto8 twelveforeach andvaccinated