柔肝复方及单味药提取物对体外培养人骨关节炎软骨细胞增殖及COMP分泌的研究论文.pdfVIP

中华中医药学会骨伤分会第四届第二次学术大会论文汇编 柔肝复方及单味药提取物对 体外培养人骨关节炎软骨细胞增殖及COMP分泌的研究。 l上海中医药大学骨伤研究所； 2上海市伤骨科研究所；3上海中医药大学中药标准化研究中心 曹月龙1，王翔1，冯伟2，王顺春3，徐宇1，詹红生‘，石印玉1 肌肉骨骼系统的健康已成为社会和医务界所共同关注的卫生保健问题，国际上一些骨科专家和 患者共同努力发起“骨骼与关节健康十年行动2000—2010”，并获得了世界卫生组织和世界银行的 积极支持。目前已有美国、英国等42个国家和地区的政府正式宣布认可和支持此项行动。2002年 10月12日，第三个国际关节炎日，中国政府宣布正式加入此项计划的实施中。关节炎共有100多 种类型，其中以软骨退变为主要特点的骨关节炎是最常见类型之一。在我国38—60岁人群中，78．5％ 患有骨关节炎，成为功能病废、生活质量下降的主要原因之一。 专家指出的骨关节炎治疗原则包括有患者的教育、理疗、药物治疗和非药物治疗等。按中医理 论认为本病系筋骨失养，肝肾虚衰所致，因此，临床以调摄肝肾为治疗原则，中药多以补肾或柔肝 药为主。在继往对补肾和柔肝中药防治骨关节炎研究基础上‘i，ii3，本研究探讨柔肝单味药提取物及 matrix 复方对体外培养软骨细胞增殖能力及关节软骨低聚基质蛋白(cartilageoligomeric proteinCOMP)分泌的影响。 l材料与方法 1．1细胞取材与药品 膝骨关节炎病人软骨由上海瑞金医院骨科关节镜手术时提供。平均年龄53岁， Kellgren／Lawrence(1957)膝骨关节炎影像学分级量化评判为III级。 柔肝复方为养血软坚胶囊(BNHS)由白芍、牡蛎等养血柔肝药组成(曙光医院院内制剂，批号： 号。 1．2软骨细胞的分离与培养 无菌条件下，用尖刀片仔细分离胫骨平台、股骨髁以及髌骨关节面的软骨。切取软骨时，尽量 mmXlmm 避免切到软骨下的骨质，一般以不渗血为度。将软骨块用D-Hanks液漂洗3遍后，切碎至l 目尼龙网筛过滤，留软骨碎块，以去除可能存在的软骨膜细胞：将软骨块置0．05％的粗品胶原酶溶 液中，37。C孵育、消化，分阶段进行，每阶段45min，共4阶段。120目尼龙网筛过滤，细胞悬液， 洗后的细胞接种在25am2培养瓶(Unclon，丹麦)中；置37。C 5％C02培养箱中培养，逐日倒置显 上海市自然基金(04ZRl4128)、上海市卫生局项目(2006T005A)资助。 171 中华中医药学会骨伤分会第四届第二次学术大会论文汇编 微镜观察，隔2-3天换液、原代贴壁细胞生长细胞铺满后，进行传代培养或冻存以备用。 1．3体外实验 1．3．1 MTS／例S法观察柔肝单味药提取物及复方对体外培养人0A软骨细胞增殖的影响 软骨细胞分离方法同前。将传代细胞(第1代)接种在96孔板中，分RGL及BNHS二个药物干预组 1．3．2 ELISA法观察柔肝单味药提取物及复方对体外培养的人oA软骨细胞COMP分泌的研究 传代0A软骨细胞(第1代)以1X105／cm2密度接种在96孔培养板中，连续培养3天，药物添 加终浓度为lOmg／ml，每组6个复孔。收集细胞上清，混合冻存备用。 COMP 一抗，置振荡器中孵浴5min，4℃过夜，自准备的培养板中每孔取lOOul至抗原包被板中，室温孵 并以洗水纸吸干；室温下加入100ul 1．4统计学分析 所有数据以X±s表示。尺O．05表示差异有统计学意义。采用SPSSll．0进行数据分析计算。采 用重复测量方法(GeneralLinearModel Measures)对不同组不同观察时间的结果进行检 Repeated 验，同时间点不同组间采用方差分析(ANovA)。 2．结果 2．1药物对体外培养人