肉种鸡MDV和REV共感染动态病理学与抗原定位的研究论文.pdfVIP

肉种鸡MDV和REV共感染动态病理学与抗原定位的研究+ 刁秀国“ 朱 国 成子强… 王桂花 孟祥凯 高婷婷 崔治中 (山东农业大学动物科技学院 山东泰安271018) 摘要：为进一步深入了解MDV与REV混合感染肉种鸡后疾病的发生、发展状况，并确定最佳的鉴别诊断时间。通过 人工共感染1日龄肉种鸡MDV强毒株和REV强毒椿，定期剖检，进行病理组织学、细胞凋亡、抗原定位和肿瘤组织的超微 结构观察。结果表明肝、胰腺、腺胃、盲肠扁桃体、心肌在感染后l周出现以小淋巴细胞为主的炎症，2周后，大部分组织器 官出现以幼稚淋巴细胞、大中小淋巴细胞为主的增生灶，有的增生灶中可见原始网状细胞和马立克氏病细胞；电镜下，肝脏 肿瘤组织有大小不同的淋巴细胞、MDV和REV，并见淋巴细胞的凋亡和核分裂相；10周后免疫器官出现明显的细胞凋亡； 免疫组化显示。肝、脾、法氏囊、胸腺等在2周时呈双抗原阳性。动态病理学研究发现，混合感染比单独感染发病旱、病变明 显：混合感染最初以炎症变化为主，后期以多种肿瘤细胞增生灶为特征。因此，感染早期可通过病理组织学进行鉴别诊断， 两种病毒粒子、马立克氏病细胞、原始网状细胞、多形态和幼稚淋巴细胞可作为诊断依据；感染后期，可通过免疫酶组织化 学、免疫荧光组织化学等敏感方法进行检测。 关键词：马立克氏病病毒；网状内皮组织增殖病病毒；混合感染；动态病理学；抗原定位 目前，国内以马立克氏病(Marek’sdisease，MD)为主的禽肿瘤性疾病的发病率较高。韦平等…曾对 常高，尤其是MDV和REV的共感染比例可达肿瘤病的40％[2r3】。因此，对禽肿瘤病毒混合感染的发病情 况与鉴别诊断的全面研究非常必要。对于禽肿瘤病的研究主要限于病毒分离、病毒抗原的检测、PCR、斑 点杂交等分子生物学诊断，而对于MDV与REV混合感染后的发病情况还无人进行详细研究。本研究以 常规病理学、超微病理学为手段对共感染病鸡进行详细病理学观察；以免疫酶组织化学、免疫荧光组织化 学进行抗原定位及鉴别诊断，配合凋亡确定其与发病的关系。确定MDV和REV共感染的发病情况及特 征性病理变化；明确两种病毒的抗原定位及作为鉴别诊断方法的敏感性。 1材料与方法 1．1 材料 1．1．1实验鸡 84只未经任何处理的1日龄哈伯德肉种鸡，购自潍坊昱合畜禽有限公司。 1．1．2种毒 MDV为RBlB株，REV为SNV株，均由本实验室冻存。 ·基金项目：中国博士后科学基金项且(2005038258)。 ¨·通讯作者：成子强．主要从事动物分子病理学研究．Teh0538—82．49526；E-meil：dl五lliens@mhu．啪。 4 2007学术年会 1．1．3试剂 细胞凋亡检测试剂盒，购自武汉博士德生物工程有限公司。抗lVIDV抗体为单克隆抗体BA4；抗REV 的羊抗鼠IgG抗体，均购自华美公司。 1．2方法 1．2．1实验鸡分组、攻毒、饲养 随机分为四组，每组各21只，隔离饲养。1日龄时，攻MDV组每只鸡腹腔接种MDV0．2mL，约为 1000PFU／只；攻REV组腹腔接种REV O．3mL，约为l旷‘2T℃D卯，只；混合感染组同时腹腔接种MDV和REV， 1．2．2病料采集 于1、2、4、7、10、13、18周龄剖杀鸡只，每次3只，并分别取脑、气管、肺、胸腺、骨骼肌、心肌、肾、肾上 腺、睾丸／卵巢、肝、胆囊、腺胃、肌胃、胰腺、十二指肠、盲肠扁桃体、脾、法氏囊、骨髓、坐骨神经于10％中性 福尔马林固定。取肝脏肿瘤，于2．5％戊二醛磷酸缓冲液中预固定，1．4。C保存。 1．2．3电镜制样、观察 肿瘤组织l％锇酸复固定，丙酮梯度脱水，Epon812环氧树脂包埋，LKB—V型超薄切片机切片，醋酸 双氧铀和柠檬酸铅双重电子染色，日立H一600型电镜观察、拍照。 1．2．4细胞凋亡 细胞凋亡原位检测，参照试剂盒说明书进行。 1．2．5免疫组化 制作连续切片，对每一组织分别用MI)、RE单克隆抗体进行免疫酶组织化学染色和免疫荧光组织化 学染色。操作步骤，参照文献进行[4]。 2结果与分析 2．1 共感染组病理组织学变化 2．1．1神经系统 大脑和小脑均成渐进性病毒性脑炎变化，后期有多形态淋巴细胞及幼稚淋巴细胞增生。攻毒后l 周，血管周围有少量的小淋巴细胞围成血管套；2周病变趋于严重，血管套中出现了幼稚淋巴细胞，这些细 胞染色质较少；13周时，形成众多的淋巴细胞和幼稚淋巴