软骨组织工程载体-关节软骨源性支架的系列研究.pdfVIP

小；④比填塞骺板软骨更容易通过渗透获得营养。 膝骨关节炎前交叉韧带l、III型胶原纤维定量分析及组织学研究 薛静刘玉杰 解放军总医院骨科研究所 目的： 探讨老年膝骨关节炎(OA)前交叉韧带退变时l、IJI型胶原纤维的分布、含量与组织 学改变特点。 方法： 选择膝关节OA患者全膝关节置换术中切取的前交叉韧带27例(29膝)和正常膝 关节新鲜ACL标本5例，采用苦味酸．天狼猩红染色观察并分析前交叉韧带中I、III型胶原 纤维的分布、含量和比例改变。HE染色观察前交叉韧带的组织学变化。 结果：苦味酸．天狼猩红染色发现：正常前交叉韧带胶原排列整齐，偏振光下呈横纹肌样排 列，主要由I、ⅡI型胶原构成，I型胶原粗大，含量较多，在韧带内呈弥漫性分布；IIl型 较少多分布在各束韧带的内部。OA患者的前交叉韧带胶原排列紊乱，Ill型胶原含量增多， I型胶原明显减少。HE染色组织学观察到OA患者前交叉韧带松散，有不同程度的纤维结 缔组织变性，表现为不均匀的纤维细胞数目增多或减少，可见粘液变性、软骨样化生、囊性 变及玻璃样变性，并有淋巴细胞浸润。 · 结论：膝关节OA伴有前交叉韧带退变时I、lH型胶原纤维的分布与含量有改变，ACL退变 与OA具有相关性。苦昧酸．天狼猩红染色可以应用于观察并计算ACL中I、III型胶原的分 布与含量的变化。 软骨组织工程载体一关节软骨源性支架的系列研究 张建党彭江郭全义张莉赵斌睦翔许文静卢世璧 中国人民解放军总医院骨科研究所 目的：关·17软骨损伤是关。H外科常见的疾病，但由于软骨组织自我修复能力有限，近年来探 索的众多方法如骨膜下钻孔，关节微创手术，自体或异体组织移植等，都不能够达到令人满 意的效果。组织工程技术被认为是解决这一问题最有前景的方法。组织：l：程研究的三个要素 是种子细胞、支架材料和信号调控。理想的支架是组织关键的一环。目前已有多种材料被制 备成不同结构的支架，如聚丙交酯聚已交酯共聚物(PLGA)、壳聚糖、藻酸盐和I型胶原 等。遗憾的是，这些材料均不具备细胞外基质的功能和作用，本身缺乏软骨细胞特定的细胞 识别信号。如何选取合适的基质材料成为组织工程成败的决定性冈素。软骨细胞脱细胞处理 去除了细胞抗原等免疫性物质而保留了人部分细胞外基质，因此，天然细胞外基质材料是良 好的支架材科。本课题着重建立人关：1y软骨脱细胞基质的制备以及在其基础上分别源性微载 体和源性海绵技术，然后对其进行一系列检测，目的是探索一种更好的软骨组织l：样的支架 材料． 方法：1．建立人关节软骨脱细胞基质的制备方法：1)把关节软骨剪裁成一定大小的关节软 骨块，冻干后依次进行下列脱细胞处理：首先放入含蛋白酶抑制剂的低渗Tris—HCL缓冲液 低温振荡24h，然后用1％Triton X-100、Tris-HCL液(V／V) 最后用DNase和RNase混合液37C消化过夜后置于1％Triton 低温洗脱24h，取出后用dH20冲洗48h，完成制备：2)对脱细胞块进行光镜以及番红花“O”、 2．建立关节软 软骨蛋白聚糖、II型胶原免疫组化染色观察；3)压汞法进行孔隙率检测； 骨源性微载体的制备方法：1)切取关节软骨，冷冻干燥并粉碎，筛取200～150#m大小的 软骨粒，胰酶消化后，再经去污剂TritonX．100振荡72h，完成制备；2)对标本进行光镜、 HE染色、番红花“O”、软骨蛋白聚糖、II型胶原免疫组化染色观察；3)进行关节软骨源性 微载体与软骨细胞体外相容性检测；3．建立制各关节软骨海绵的制备方法：1)切取取关节 振荡72h，冻干12h，紫外照射8h，完成制备；2)对标本进行抗离散实验检测以及电镜和 压汞法测定孔径和孔隙率；3)对标本进行体内降解时间、细胞毒性、细胞免疫学以及体外 相容性检测； 结果：1．对人关节软骨脱细胞基质的制备方法进行评价：倒置显微镜显示细胞陷窝内无细 胞结构，番红花“O”阳性、软骨蛋白聚糖免疫组化染色阴性、II型胶原免疫组化染色阳性， 结果表明，人关节软骨冻干后，经去污剂一酶等方法处理后可脱去软骨的细胞成分，并且保 留了软骨细胞外基质，成功制各了人关节软骨脱细胞基质。但经压汞法检测，其孔隙率为 45％，过低，作为支架仍欠理想：2．对关节软骨源性微载体方法进行评价，倒置显微镜下 软骨粒呈绒球状或毛刷状，HE染色显示无软骨细胞，番红花“O”弱阳性、，软骨蛋白聚糖免 疫