三七提取物对溃疡性结肠炎大鼠结肠血管生成的研究论文.pdfVIP

三七提取物对溃疡性结肠炎大鼠结肠血管生成的研究 朱凌宇 顾贤 (上海中医药大学附属龙华医院消化内科，上海中医药大学脾胃病研究所 200032） 摘要 目的 从血管生成角度研究三七提取物促进结肠溃疡愈合的作用机制。方法 制备三 硝基苯磺酸（TNBS ）诱导结肠炎大鼠，分为三七提取物低剂量组、中剂量组、高剂量组、 柳氮磺胺吡啶组、模型对照组、模型组和正常对照组。其中模型组于造模 3d 时处死，其余 6 组均在给药处理 7d （即造模10d）时处死。取大鼠结肠病变部位标本，进行组织学评价， 运用免疫组化染色法检测血管内皮生长因子（VEGF ）、低氧诱导因子（HIF-1 ）蛋白表达， 用 RT-PCR 法检测 VEGF 、HIF-1 的mRNA 表达。结果 与模型对照组和柳氮磺胺吡啶组比 较，三七提取物低、中和高剂量组大鼠结肠粘膜明显炎症消除和溃疡愈合，杯状细胞数量及 粘液增加，VEGF 、HIF-1 表达显著增加。结论 （1）血管生成在TNBS 诱导大鼠溃疡性结 肠炎形成和愈合过程中起重要作用。用药后 VEGF 、HIF-1 表达增加。（2 ）三七提取物通过 上调 VEGF 、HIF-1 表达而促进血管生成，是其治疗溃疡性结肠炎的主要作用机制之一。 关键词 三七提取物；溃疡性结肠炎；血管生成；血管内皮生长因子；低氧诱导因子 溃疡性结肠炎（ulcerative colitis ，简称溃结或 UC ）是发生在直、结肠部位的原因不明 的慢性非特异性炎症性肠病，其病因及发病机制尚未完全清楚，该病治愈难度较大，容易反 复发作，且被认为与结肠癌的发病有关，是现代医学的难治病之一。笔者导师马贵同教授所 研制的清肠栓，治疗溃疡性结肠炎疗效显著。方中活血化瘀的三七被认为发挥了重要作用 [1]。笔者该研究旨在从血管生成角度研究三七提取物促进结肠溃疡愈合的作用机制。 1 材料与方法 1.1 动物 清洁级 SD 大鼠 72 只，雄性，每只体重 165～195g，购自上海斯莱克实验动物有 限责任有限公司。合格证编号：SCXK(沪)2003-0003 。 1.2 实验药物及试剂 三七提取物委托上海家化医药科技有限公司制备。进行提取工艺的正 交设计，以提取物中总的人参皂苷 Rg1 和 Rb1 的得率。确认煎煮三次，每次加 12 倍量 70 ％醇，每次煎煮 1.0h 的提取过程得率较高。TNBS 为美国 Sigma 公司产品。柳氮磺胺吡啶 （salicylazosulfapyridine, SASP ）由山西三九同达药业有限公司生产，产品批号：050902 。 VEGF 、HIF-1α试剂皆由 santa cruz 提供。 1.3 动物分组与造模 大鼠称重，随机分为 7 组，即正常对照组、模型组、模型对照组、SASP 组、三七提取物低剂量组、三七提取物中剂量组、三七提取物高剂量组。除正常组大鼠之外， 其余动物参照文献制备 TNBS 诱导结肠炎大鼠模型[2]。造模前将大鼠禁食不禁水24h 。腹腔 849 注射氯胺酮（0.2ml/100g ）麻醉大鼠，用大鼠直灌胃针从肛门插入肠道深约 8cm，平均向每 只大鼠结肠内注入 100mg/ml 浓度 TNBS 原液 50%乙醇溶液，并用夹子夹住大鼠肛门约2h 。 造模后大鼠归笼，自然清醒，自由饮食。模型组大鼠在造模 3d 后处死，以观察造模效果。 1.4 给药方法 于造模后第 3d 开始，各组大鼠灌胃给药，每天给药 1 次，连续给药 7d 。给 药期间各组大鼠自由进食、饮水。正常对照组、模型对照组给予等体积（即 2ml ）的生理盐 水灌胃。SASP 组以 0.8g/kg d 的 SASP 溶液灌胃（相当于成人常用量的 10 倍）。三七低、 中、高剂量组分别以 0.1g/kgd （即0.02g/2ml ）、0.2g/kgd （即0.04g/2ml ）、0.4g/kgd （即 0.08g/2ml ）三七提取物溶液灌胃，分别相当于成人常用量5 倍、10 倍、20 倍。 1.5 标本采集 模型组于造模处理 3d 时处死，其余各组大鼠于造模处理 10d 时(即给药 7d) 处死。其中中剂量组于给药第五天时死亡大鼠 1 只