HPLC-紫外法测定人血浆中瑞芬太尼浓度.docVIP

HPLC-UV法测定人血浆瑞芬太尼浓度 广州军区广州总医院麻醉科 广州 510010 张兴安, 赵高峰, 吴群林, 徐 波, 屠伟峰, 王 捷 摘要：目的 建立高效液相色谱-紫外检测法测定人血浆瑞芬太尼浓度的方法, 为瑞芬太尼临床血药浓度监测及毒理学和药代动力学的研究打下基础。方法 Bio-rad2800高效液相色谱仪,UVI806型多功能可变波长紫外检测器，7125型HPLC进样阀，色谱工作站；瑞芬太尼标准品(批号：030404)由宜昌人福药业有限责任公司提供。色谱柱Hypersil CN柱(4.6mm×250mm,5μm)；保护柱(40mm×10mm,10μm), 检测波长210nm。取肝素抗凝新鲜全血3ml，在每1ml血中迅速加入20μl 10mg/ml柠檬酸后4～6℃保存。4~6℃离心机离心10min(1000 r/min)后，4℃以下环境中精取血浆1.0ml冰冻保存。标本化冻后每1.0ml血浆中加入1.0ml甲醇，涡旋10s后4～6℃离心机离心3min，上悬液，加入1ml 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液(pH 7.4)、 5ml氯丁烷，涡旋30s，取有机相低温保存。以Hypersil CN(4.6mm×250mm,5μm)为固定相；含0.02mol/LNaH2PO4的水溶液-乙氰(70：30)，内含三乙胺0.01%为流动相，流速1.5ml/min，空白血浆在7 min～8 min处无峰出现，基线平稳，血中物质对瑞芬太尼的分离无干扰。结果 对麻黄素、阿托品、氟哌利多、鲁米那、琥珀胆碱、维库溴胺、利多卡因、咪唑安定、芬太尼、异丙酚等进行干扰实验，结果显示上述药物对本测定无干扰。瑞芬太尼的保留时间为7.20 min 瑞芬太尼在1～100ng/ml浓度范围内线性关系良好，回归方程为Y = 1.021 + 0.000397X，r = 0.998。标准曲线在1.0～100ng/ml范围内线形关系良好(r=0.998)。方法回收率为（113.18±12.26）%，提取回收率为（87.90±3.21）% ，日内变异和日间变异分别小于10%、15%。结论 采用取血后迅速在每1ml血中迅速加入10mg/ml柠檬酸20μl，这样可通过降低pH值而抑制水解酶的活性。在使用氯丁烷萃取前，在血浆中加入甲醇去除血浆中的蛋白质，防止萃取涡旋时标本的乳化，并降低了瑞芬太尼的酯酶水解。从取血样后即刻至进样时，标本始终保持在4℃以下环境中，以减少瑞芬太尼的降解和降低检测变异度。在流动相中加入微量的三乙胺可改变瑞芬太尼的保留时间，使该药与较近的干扰峰(如利多卡因、咪唑安定等)保持较好的分离度。本方法准确，灵敏，专一性好，是一种经济、可行的血浆瑞芬太尼药物浓度检测方法。适用于临床瑞芬太尼血药浓度检测和药代动力学研究。 2