SARS-3CL蛋白酶基因在杆状病毒载体中的构建及其转染.pdfVIP

550 SARS一3CL蛋白酶基因在杆状病毒载体中的构建及其转染 侯庆华侯英奇梁念慈 摘要目的：构建SARS冠状病毒3CL蛋白酶基因的杆状病毒重组供体质粒，包装重组3CL蛋白酶的杆状病毒， HTb的转化菌，用酶切连接法构建重组转座质粒 感染昆虫细胞进行表达。方法：首先扩增含3cl-Teasy和pFastBac HrIb一3cl。将该质粒转化E．coliDHl0Bae感受态菌，在菌体内进行重组，并经j重抗性和蓝白斑筛选，得到杆状病 pFB 染St9昆虫细胞并进行蛋白表达。利用SDS检测蛋白表达情况。结果：成功构建了重组表达载体并得到了重组 杆状病毒，SDS—PAGE检测到有3CL蛋白酶表达。结论：3CL蛋白酶在昆虫细胞中的表达为蛋白活性的检测及抑制剂 的筛选奠定了基础。 关键词SARS病毒病毒蛋白质类基因杆状病毒科质粒转染 ConstructionandTransductionofSARS一3CLProteaseGeneinBaculovirus·Vector HOU