PARP蛋白家族成员抑制剂选择性特征分析.pdfVIP

PPARP蛋白家族成员抑制剂选择性特征分析ARP蛋白家族成员抑制剂选择性特征分析 应 用 文 人多ADP核糖聚合酶家族成员PARP1的抑制剂目前正被 献 应用于癌症治疗的临床试验阶段。本研究使用Biacore T200 (GE Healthcare) 对RARP酶与一组来自特定化合物库的低分 子量潜在抑制剂之间的相互作用进行研究，根据结合的选 14 择性和亲和力首先进行筛选、鉴定及hits排序。随后在Biacore T200上对选出的先导样品进行详尽的动力学分析来解释亲 和性差异并提供关于结合机制的信息，所得到的数据与同 样用来鉴定相互作用的差示荧光扫描（DFS）分析结果进行 比较，差示荧光扫描常用于分析低分子量化合物与蛋白质 的相互作用。在使用Biacore T200进行的分析中，可以根据 分子之间相互作用特征来区分各种靶蛋白的潜在抑制剂，尽 管它们所结合的活性位点高度相似。此外，还可以轻松地 鉴定出特定靶蛋白的弱结合物。而DSF虽然适用于高亲和力 化合物的鉴定，却不能可靠地鉴别出弱结合物，或准确根 据亲和力对化合物进行分级。 图1.TNKS2酶的催化位点与其抑制剂XAv939（此处标为化合物1）之间相 互作用的模型。通过Biacore T200对亲和力及动力学相互作用详细进行了 表征。 简简介介 材材料与方法料与方法 PARP蛋白家族由17种酶组成。这个蛋白家族中被研究 对根据专利文献（PARP1）和结构（PARP1及PARP3） 最为深入全面的成员PARP1被证明通过多ADP核糖基化作用 所选出的184种化合物组成的库进行检测。已知25%的化合 参与细胞对DNA损伤的反应。尽管对于PARP家族的其他成 物为PARP的抑制剂或类似物，而其余的则是通过基于结构 员了解较少，但是它们的重要性也引起了关注。例如tankyrases 的虚拟筛选而选出来的。对初次筛选之后选出来的化合物 (TNKS1/2，也称作RARP5a/5b) 最近被发现在Wnt信号传导途 进行深入的动力学表征，使用SPR 或 DSF进行筛选阶段各 径中起到正向调节的作用，并且有证据表明对tankyrase的 个步骤及最终的动力学分析。 抑制在人肿瘤抑制基因BRCA编码蛋白缺失的情况下可以诱 发细胞凋亡。因此，PARP1、ankyrases及RARP家族中的其 采用重组DNA技术在SGC中表达靶蛋白（1）。 他某些成员可以作为抗癌药物的潜在靶点（图1）。全面深 入研究配体选择性的分子基础可以大大加速RARP酶抑制剂 在使用Biacore T200进行筛选之前，用量热法对蛋白的 的研制。一个旨在对医药领域的蛋白质进行三维结构测定 质量进行评估。对于TNKS1 和TNKS2，这一步可使用MicroCal™ 的加拿大、瑞典和英国的公私合作合作组织——结构基因 VP-ITC等温滴定微量热仪（GE Healthcare）用已知抑制剂 组协会（SGC）对整个PARP蛋白家族的结构进行了系统的 进行一系列等温量热滴定来完成。 测定，并且迄今为止已经测定了9个不同催化结构域的结构。 用强抑制剂化合