二维液相色谱技术纯化和分析单克隆抗体-DGLC-28.pdfVIP

- 关键词：单克隆抗体；纯化；分析；二维液相 DGLC-28 Development of an Automated Method for DGLC-28 二维液相色谱纯化和分析单克隆抗体 Monoclonal Antibody Purification and Analysis by 2D-HPLC 关键词：单克隆抗体；纯化；分析；二维液相 Key words ：Monoclonal Antibody, Purification, Analysis, 2D-HPLC DGLC-28 Development of an Automated Method for Monoclonal Antibody Purification and Analysis by 2D-HPLC 引言 Key words ：Monoclonal Antibody, Purification, Analysis, 2D-HPLC 在生物制药的每个生产环节，产品的纯化和分析过程至关重要。早期抗体的质量控制过 程中，需要测定样品的效价、聚集体和电荷亚型。单克隆药物 （MAb ）产品中两个主要的 引言 杂质是电荷亚型单抗和单抗聚集体，这些副产物会产生与主产品不同的药效，有时会引起严 在生物制药的每个生产环节，产品的纯化和分析过程至关重要。早期抗体的质量控制过程中，需要测定 重的副作用，如抗药性抗体的形成。蛋白聚体是在生产过程、纯化或者运输过程中产生 （如 样品的效价、聚集体和电荷亚型。单克隆药物（MAb ）产品中两个主要的杂质是电荷亚型单抗和单抗聚集体， 温度，pH 的影响）。 这些副产物会产生与主产品不同的药效，有时会引起严重的副作用，如抗药性抗体的形成。蛋白聚体是在生 产过程、纯化或者运输过程中产生（如温度，pH 的影响）。 图1 (A) UltiMate ™ 3000 钛系统 图1(A) Thermo Scientific Dionex UltiMate™3000 钛系统 (B) WPS-3000T(B)FC 生物兼容的自动进样器和收集模块. (B) Thermo Scientific Dionex WPS-3000T(B)FC 生物兼容的自动进样器和收集模块. 在抗体的纯化过程中，第一步用蛋白亲和色谱进行分离。在Protein A 或G 色谱柱上进行亲和色谱一步 在抗体的纯化过程中，第一步用蛋白亲和色谱进行分离。在Protein A 或G 色谱柱上进 分离后纯度能到达95% 以上。为了确定纯化的效率、样品的纯度和抗体的质量，需要采用离子交换色谱（IEC ） 或者体积排阻色谱（SEC）进行测定。SEC 技术用来确定抗体的聚体和体积异构体。离子交换色谱的固定相 行亲和色谱一步分离后纯度能到达95% 以上。为了确定纯化的效率、样品的纯度和抗体的 能够对蛋白类生物药物的不同电荷亚型进行分离，通过优化色谱条件可以将这些具有细微变化的亚型分离开。 质量，需要采用离子交换色谱 （IEC ）或者体积排阻色谱 （SEC ）进行测定。SEC 技术用来 本文讨论了采用一套HPLC 系统（如图1A）实现单克隆抗体的自动纯化和分离（IEC 或SEC）。二维 确定抗体的聚体和体积异构体。离子交换色谱的固定相能够对蛋白类生物药物的不同电荷亚 液相色谱可实现复杂蛋白的全自动分析。HPLC 系统的自动进样器具有进样、收集样品和再进样的功能。整 个过程可通过赛默飞变色龙软件实现全自动运行。 型进行分离，通过优化色谱条件可以将这些具有细微变化的亚型分离开。 2 16 应用文集 图2 自动离线2D 系统结构图（带收集功能的WPS-3000T(B)FC 自动进样器） 测试条件 HPLC 实验配置Dionex Ultimate 3000 钛系统： SRD-3600 真空脱气机 DGP-3600BM ×2 双梯度泵系统