以布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶为靶标的抗锥虫药物筛选系统的建立.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（１２）：１３～１７ 以布氏锥虫亮氨酰ｔＲＮＡ合成酶为靶标的 抗锥虫药物筛选系统的建立 杲光伟　姚　璎　丁大中　叶　龙　周虎臣　李大伟 （上海交通大学药学院化学生物学研究所　上海　２００２４０） 摘要　锥虫是人的血液寄生虫，对热带乃至拉丁美洲贫困地区影响极大，但目前的传统治疗药物 存在副作用大、有效性不断降低的问题。根据亮氨酰ｔＲＮＡ合成酶在微生物中可作为药物靶点的 事实，在新型抗锥虫药物筛选中，通过对锥虫的亮氨酰ｔＲＮＡ合成酶的克隆、表达和纯化，以及该 酶活性测定的优化，建立了该酶抑制物的筛选系统。筛选结果表明，这一以锥虫亮氨酰ｔＲＮＡ合 成酶为靶标的抗锥虫药物筛选系统可以有效筛选抗锥虫化合物，选出的化合物有一定的抗锥虫 特异性，并可以用于化合物的进一步优化和测定其半抑制浓度。使用这一系统筛选到了对锥虫 有较好抑制作用，但对人类细胞毒性较小的一系列新型化合物，因而锥虫亮氨酰ｔＲＮＡ合成酶很 可能成为开发有效抗锥虫药物的新靶标。 关键词　布氏锥虫　亮氨酰ｔＲＮＡ合成酶　药物筛选 中图分类号　Ｑ８１９ 　　布氏锥虫（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｂｒｕｃｅｉ）是一种主要分布在非 大大降低 ａａＲＳ与底物 ｔＲＮＡ和氨基酸的亲和力，从而 洲，尤其是撒哈拉以南地区的一种寄生原虫，通过采采蝇 ［１０］ 影响病原菌的存活 ，故而ａａＲＳ可以成为抗寄生虫药 叮咬传播而寄生在脊椎动物血液或组织中，使宿主感染 物潜在而有效的作用靶标。基于这一特征，全球很多 ［１～３］ “非洲睡眠病”或嗜睡性脑炎 。锥虫病晚期病人会慢 实验室都在针对各物种的不同氨酰 ｔＲＮＡ合成酶如 慢出现其它神经系统毛病，昏睡情况会逐渐增加，最终导 ＬｅｕＲＳ，ＩｌｅＲＳ，ＭｅｔＲＳ，ＰｈｅＲＳ等进行相关功能研究以 ［３，４］ 致昏迷并造成死亡，睡眠病亦因此而命名 。目前，还 及化合物的设计筛选［７，８，１１～１４］，而目前在国内外还没有 没有有效药物可预防非洲锥虫病，因此能够筛选出抑制 关于布氏锥虫亮氨酰 ｔＲＮＡ合成酶（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｂｒｕｃｅｉ 锥虫生长的药物成为当务之急。非洲锥虫病的防治已经 ｌｅｕｃｙｌｔＲＮＡｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ，ｔｂＬｅｕＲＳ）的相关研究报道。 引起世界卫生组织、联合国工业发展组织以及国际农业 ［５］ 发展基金等机构的高度关注 。 １　材料与方法 　　氨酰 ｔＲＮＡ合成酶（ａｍｉｎｏａｃｙｌｔＲＮＡｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ， １．１　材　料 ａａＲＳ），是生命进化过程中最早出现的一类蛋白质，它 　　大肠杆菌 ＢＬ２１（ＤＥ３）ＲＩＰＬ和重组质粒 ｐＥＴ２１ａ 催化氨基酸的活化并使之与其关联的ｔＲＮＡ结合，而这 ｔｂＬｅｕＲＳ为本实验室保存。氨苄青霉素、异丙基Ｄ β 是蛋白质合成过程中的一步关键反应。氨基酸与关联 硫代半乳糖苷（ＩｓｏｐｒｏｐｙＤｔｈｉｏｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ；ＩＰＴＧ）购自 β ｔＲＮ