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[ ] 使用UPLC/MS/MS分析血清中的25-羟基维生素D Lisa J Calton, Scott D Gillingwater, Gareth W Hammond, Donald P Cooper 沃特世公司临床业务部(英国曼彻斯特阿特拉斯商业园) 实验 简介 将Waters® ACQUITY® 串联四极杆检测器(TQD) 临床研究表明：维生素D缺乏症在世界许多地区的成人和儿童中非常普遍。 与ACQUITY UPLC®联用以进行各项分析。完整 除了众所周知的影响(例如与钙吸收障碍相关的佝偻病、骨质疏松症和骨 的系统配置如图1所示。仪器通过MassLynx® 软化症)外，现在越来越多的证据表明维生素D缺乏症还会增加罹患某些 4.1软件在电喷雾正离子模式下运行，并采用 癌症的风险，并对许多其它疾病有一定的影响1,2。维生素D具有两种存在 QuanLynx™应用软件自动进行数据处理。 形式，一种是皮肤暴露于日光下所产生的维生素D3 (D3)，另一种则是存在 于多种补品中的植物衍生物— 维生素D (D2)。维生素D在肝脏中代谢形成 对锥孔电压进行优化，使得进入离子源的母 2 25-羟基维生素D [25OHD]，后者在肾脏中进一步代谢形成活性代谢物1,25- 离子的丰度最大化，并通过第一级四极杆选 二羟基维生素D。25OHD的水平被认为是评价体内维生素D水平的最佳临床 择相应的母离子进入碰撞池。利用氩气和 指标3 。维生素D水平的评估对于维生素D缺乏症的诊断和补充治疗的监测 碰撞能量促使碰撞诱导解离，生成特征性 非常重要。最近，相对于竞争性结合检测、免疫检测和HPLC法等其它方法， 产物离子。利用此方法建立特异的多重反应 利用LC/MS/MS方法定量分析25OHD2和25OHD3在提高检测质量和降低成 监测(MRM)，实验如表1所示。 本方面，更加受到人们的青睐。免疫检测的主要问题是无法区分25OHD2和 25OHD3，还需依靠抗体与25OHD2的交叉反应才能测定25OHD的总浓度。如 LC条件 4 果该交叉反应低于100%，那么D2治疗可能无法得到准确监测。 LC系统： Waters ACQUITY UPLC 系统 色谱柱： ACQUITY UPLC BEH C , 8 2.1 x 50 mm, 1.7 μm 柱温： 45 ˚C 流速： 400 μL/min 流动相A： 2 mM醋酸铵+ 0.1% 甲酸的 水溶液 流动相B： 2 mM醋酸铵+ 0.1% 甲酸的 甲醇溶液 梯度： 流动相B在7 3%保持 2 min，在1.5 min内从73% 图1. 沃特世ACQUITY UPLC/TQD 的系统配置。 增加至98% 1 [ ] MS条