2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶在毕赤酵母中的分泌表达.pdfVIP

第 卷第 期 南昌大学学报（理科版） Ｖｏｌ．３８ Ｎｏ．１ ３８ １ 　 　 年 月 　　 　　　 （ ） Ｆｅｂ．２０１４ ２０１４ ２ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｃｈａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ 文章编号： （ ） １００６０４６４ ２０１４ ０１００７４０５ 　 　 脱氧核糖 磷酸醛缩酶在毕赤酵母中的分泌表达 ２ ５ ａ ａ ｂ ｂ ｂ  刘 松 ，聂 挺 ，陆 豫 ，王水兴 ，余 勃 　 　 　 　 （南昌大学 环境与化学工程学院，江西南昌 ； 中德联合研究院，江西南昌 ３３００４７ ） ａ． ３３００３１ ｂ． 　 　 要：为实现 脱氧核糖 磷酸醛缩酶基因（ ）在毕赤酵母中分泌表达。通过 从 基因组 ２ ５ ＤＥＲＡ ＰＣＲ Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１ 　 中扩增获得ＤＥＲＡ 序列，并且与毕赤酵母分泌表达载体 ｐＰＩＣ９Ｋ 进行连接，构建得到重组质粒 ｐＰＩＣ９ＫＤＥＲＡ 。重 组载体经 ｓａｌ 单酶切线性化后电击转化至毕赤酵母 感受态细胞，用 ／ 平板筛选阳性株并在含 Ⅰ ＧＳ１１５ ＭＤ ＭＭ Ｇ４１８ 的ＹＤＰ 培养基中筛选多拷贝插入菌株。经 ＰＣＲ 鉴定获得一株插入 ｐＰＩＣ９ＫＤＥＲＡ 的多拷贝嗜甲醇重组毕赤酵母 菌株。用甲醇诱导该重组菌株，分泌得到具有活性的 脱氧核糖 磷酸醛缩酶，且 时酶活为 · － １ 。 ２ ５ ７２ ｈ ２．４ Ｕ ｍｇ 结果表明， 脱氧核糖 磷酸醛缩酶可实现在毕赤酵母中分泌表达。 ２ ５ 关键词： 脱氧核糖 磷酸醛缩酶；毕赤酵母；分泌表达 ２ ５ 中图分类号： 文献标志码： Ｑ７８５ Ａ 　 　　　 Ｓｅｃｒｅｔｏｒ ｅｘ ｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ２ｄｅｓｏｘ ｒｉｂｏｓｅ５ｈｏｓ ｈａｔｅ ａｌｄｏｌａｓｅ ｉｎ Ｐｉｃｈｉａ ａｓｔｏｒｉｓ ｙ ｐ ｙ ｐ ｐ